| 查看: 2524 | 回复: 7 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
从细菌提取一种功能蛋白，跑非变性PAGE胶无法进入胶体 已有2人参与
|
||
|
本人想从一种细菌的菌体中提取一个新的蛋白做质谱鉴定，目前只知道该蛋白的功能，但是对于蛋白的种类、分子量大小等信息都不知道。菌体用含裂解缓冲液悬浮。裂解缓冲液含有5%的甘油、20mM的Tris-Hcl（pH8.0-8.8）、50mM的NaCl。然后用高压破碎4次，压力足够大。破碎后裂解液经过13000rpm离心5分钟，取上清液直接上样做蛋白电泳，期待目标蛋白能分开。电泳采用非变性PAGE，胶浓度已调至最低4%，跑胶结束后检测胶内活性，检测结果显示目标蛋白在上样槽底部，未进入胶体。说明该蛋白的水溶解性很差。 后期为了提高溶解性，单独考察了温度（4℃、15℃、30℃）、pH（4.8-12.8）、NaCl（0-2M）浓度对该蛋白的溶解性是否有促进作用，结果均失败。 后来，添加分别单独添加多种去污剂（Triton X-100、Triton X-114、CHAPS、LDAO、OG、DDM），添加时采用溶解浓度，即10倍的CMC浓度，但是效果也很差，只有DDM有微量的促进作用，但是因效果太有限，并且太贵而终止。 问题是，在上述操作中，是否有什么不规范的操作？还有就是如何在保证蛋白活性的前提下，促进难溶解蛋白的水溶性？谢谢！ 将依据回答者的帮助程度奖励金币。 |
回复此楼» 猜你喜欢
一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂
已经有5人回复
-
323求调剂
已经有6人回复
-
352求调剂
已经有3人回复
-
一志愿东华大学化学070300，求调剂
已经有8人回复
-
277材料科学与工程080500求调剂
已经有7人回复
-
317求调剂
已经有18人回复
-
293求调剂
已经有5人回复
-
280分求调剂 一志愿085802
已经有7人回复
-
0854电子信息求调剂
已经有3人回复
-
263求调剂
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 非变性PAGE胶 跑DNA 没条带
已经有6人回复
- 生物胶的相关问题
已经有3人回复
送红花一朵 
7楼2014-02-14 10:24:59
yang0071
木虫 (职业作家)
- BioEPI: 2
- 应助: 207 (大学生)
- 金币: 1573.4
- 散金: 9319
- 红花: 21
- 帖子: 4041
- 在线: 647.7小时
- 虫号: 50941
- 注册: 2004-07-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2014-02-14 08:22:18
3楼2014-02-14 08:29:27
yang0071
木虫 (职业作家)
- BioEPI: 2
- 应助: 207 (大学生)
- 金币: 1573.4
- 散金: 9319
- 红花: 21
- 帖子: 4041
- 在线: 647.7小时
- 虫号: 50941
- 注册: 2004-07-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2014-02-14 09:01:29
