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weile_0银虫 (小有名气)
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[交流]
大片段DNA（6.4K）与载体连接所需的载体，反转录酶，PCR聚合酶的选择！！！
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| 各位大侠：小弟最近做个长片段的cDNA与T载体的连接，片段大小6.4K，载体选用的是pUC19和pGEMT-easy ,反转录酶用的是RevertAid Tirst Strand cDNA Synthesis Kit (#K1621)，CDNA第二链的扩增用的是LA Taq 。我是用纯病毒的RNA做模板，操作步骤严格按照说明做的，也曾经有一次获得过电泳图清晰显示的是全长6.4KB左右的片段，与载体连接，结果筛选到的几个克隆，插入的片段仅有2KB左右，奈何？可最近几次再用此反转录试剂盒却不能得到所需片段。在此，小弟想问问大家，你们是否遇到同样的问题，是如何解决的？所用的试剂（载体和酶的选择）和方法是什么，可以告诉后来者，共同进步吧。 |
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