| 查看: 689 | 回复: 6 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
weile_0银虫 (小有名气)
|
[交流]
大片段DNA（6.4K）与载体连接所需的载体，反转录酶，PCR聚合酶的选择！！！
|
||
| 各位大侠：小弟最近做个长片段的cDNA与T载体的连接，片段大小6.4K，载体选用的是pUC19和pGEMT-easy ,反转录酶用的是RevertAid Tirst Strand cDNA Synthesis Kit (#K1621)，CDNA第二链的扩增用的是LA Taq 。我是用纯病毒的RNA做模板，操作步骤严格按照说明做的，也曾经有一次获得过电泳图清晰显示的是全长6.4KB左右的片段，与载体连接，结果筛选到的几个克隆，插入的片段仅有2KB左右，奈何？可最近几次再用此反转录试剂盒却不能得到所需片段。在此，小弟想问问大家，你们是否遇到同样的问题，是如何解决的？所用的试剂（载体和酶的选择）和方法是什么，可以告诉后来者，共同进步吧。 |
回复此楼» 猜你喜欢
2025年遐想
已经有4人回复
-
投稿Elsevier的杂志（返修），总是在选择OA和subscription界面被踢皮球
已经有8人回复
-
自然科学基金委宣布启动申请书“瘦身提质”行动
已经有4人回复
-
求个博导看看
已经有18人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
weile_0
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 316.4
- 散金: 50
- 帖子: 119
- 在线: 13.5小时
- 虫号: 494849
- 注册: 2008-01-14
- 性别: GG
- 专业: 分子植物病毒学
3楼2008-01-15 17:40:40
weile_0
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 316.4
- 散金: 50
- 帖子: 119
- 在线: 13.5小时
- 虫号: 494849
- 注册: 2008-01-14
- 性别: GG
- 专业: 分子植物病毒学
7楼2008-01-16 10:28:05