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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 有关TSA培养微生物的问题，折腾我一个多月了
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kakarora

银虫 (初入文坛)

[求助] 有关TSA培养微生物的问题，折腾我一个多月了 已有5人参与

我用TSA培养基分菌，第一次做的时候18h之后就长菌了，现在再做，同样的步骤，同样的操作，可是现在已经24h了，一点菌都没有，是怎么回事？样品一样，同一个样品上提取的菌液，每次都是现提菌现涂布，平板也是头一天配置，无菌操作台里搁置一夜，操作一模一样，不知道为什么现在TSA就是不长菌，MRS培养基也是，第一次的时候24h左右就长了一点菌，虽然不多，但是现在也是一点都没有。我做了好几次，情况都一样，就是第一次有菌，而且长的很漂亮，后面的几次基本不长菌

如果有大神知道的话，请告诉我一下~~
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1楼 2014-01-23 13:04:07
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1550890759

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-24 19:17:14
提菌过程是不是有问题，培养箱的温度变化了吗？不清楚你的操作，从细节着手，一点点排查。祝你好运。
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纸上得来终觉浅，绝知此事要躬行。
2楼2014-01-23 13:10:37
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kakarora

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 1550890759 at 2014-01-23 13:10:37
提菌过程是不是有问题，培养箱的温度变化了吗？不清楚你的操作，从细节着手，一点点排查。祝你好运。

提菌过程和第一次一模一样，没有任何不同，培养箱温度没变过，和第一次一样的，过程什么的我读按着第一次的操作来的，不知道为什么会这样，我做过好几次了，排除了菌液问题，操作问题，现在已经不知道什么问题了
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3楼2014-01-23 13:15:34
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1550890759

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kakarora at 2014-01-23 13:15:34
提菌过程和第一次一模一样，没有任何不同，培养箱温度没变过，和第一次一样的，过程什么的我读按着第一次的操作来的，不知道为什么会这样，我做过好几次了，排除了菌液问题，操作问题，现在已经不知道什么问题了:c ...

你是从哪提菌的？
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纸上得来终觉浅，绝知此事要躬行。
4楼2014-01-23 13:37:27
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wyz5527

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2014-01-24 19:17:24
继续培养，同时用摇瓶培养测试提取菌的活力。活力低培养时间长点，再就是你的菌怎样保存的，冷冻保存还是常温保存，冷冻保存要适当进行室温活化
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简练才是真正的丰富
5楼2014-01-23 15:25:42
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fish81

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-24 19:17:35
你是从什么样品中分离菌?第二次检测离第一次检测间隔了多久? 可能你的样品中的细菌由于某种情况(无营养成分了, 代谢物积累或者环境改变等)已经没有存活的了. 我们以前也出现过过两次检测的结果明显不一样的情况.
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6楼2014-01-23 16:44:33
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kakarora

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fish81 at 2014-01-23 16:44:33
你是从什么样品中分离菌?第二次检测离第一次检测间隔了多久? 可能你的样品中的细菌由于某种情况(无营养成分了, 代谢物积累或者环境改变等)已经没有存活的了. 我们以前也出现过过两次检测的结果明显不一样的情况.

我从腌制鱼中分离菌，鱼一直放在4℃的冰箱里，真空包装着，第一次距离第二次隔了一个月，有长菌，可是都超过48小时了，基本过了三四天，而且相当少，就几个菌在平板上

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7楼2014-01-24 12:17:00
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kakarora

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 1550890759 at 2014-01-23 13:37:27
你是从哪提菌的？...

腌制鱼中

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8楼2014-01-24 12:18:44
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kakarora

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wyz5527 at 2014-01-23 15:25:42
继续培养，同时用摇瓶培养测试提取菌的活力。活力低培养时间长点，再就是你的菌怎样保存的，冷冻保存还是常温保存，冷冻保存要适当进行室温活化

4℃冰箱保存的，需要室温活化吗？怎么活化？就把样品搁在室温下一段时间？大约多久？

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9楼2014-01-24 12:20:28
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skull123

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by kakarora at 2014-01-24 12:17:00
我从腌制鱼中分离菌，鱼一直放在4℃的冰箱里，真空包装着，第一次距离第二次隔了一个月，有长菌，可是都超过48小时了，基本过了三四天，而且相当少，就几个菌在平板上
...

1、可能样品的保存方式不对，而且腌制食物也相当于一个发酵过程，发酵的前中后期细菌菌群比例以及数量都是有差异的。虽然4摄氏度，发酵过程还是在缓慢的发生。如果要保持某个时期特定的菌群不发生改变最好还是-20或者-80度保存都好吧，只不过冰冻保存细菌，解冻不知道会不会死掉一部分。
2、另外不管什么细菌的样本，都不适宜在4摄氏度保存太长时间。你这都一个月了。。。。。。4摄氏度有些菌可能放置时间长还能活，但是很多菌放置几天，或者一两个星期就死了。
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10楼2014-01-24 12:38:10
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