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kakarora

银虫 (初入文坛)

[求助] 有关TSA培养微生物的问题,折腾我一个多月了 已有5人参与

我用TSA培养基分菌,第一次做的时候18h之后就长菌了,现在再做,同样的步骤,同样的操作,可是现在已经24h了,一点菌都没有,是怎么回事?样品一样,同一个样品上提取的菌液,每次都是现提菌现涂布,平板也是头一天配置,无菌操作台里搁置一夜,操作一模一样,不知道为什么现在TSA就是不长菌,MRS培养基也是,第一次的时候24h左右就长了一点菌,虽然不多,但是现在也是一点都没有。我做了好几次,情况都一样,就是第一次有菌,而且长的很漂亮,后面的几次基本不长菌

如果有大神知道的话,请告诉我一下~~
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kakarora

银虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by 1550890759 at 2014-01-23 13:10:37
提菌过程是不是有问题,培养箱的温度变化了吗?不清楚你的操作,从细节着手,一点点排查。祝你好运。

提菌过程和第一次一模一样,没有任何不同,培养箱温度没变过,和第一次一样的,过程什么的我读按着第一次的操作来的,不知道为什么会这样,我做过好几次了,排除了菌液问题,操作问题,现在已经不知道什么问题了
3楼2014-01-23 13:15:34
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kakarora

银虫 (初入文坛)

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6楼: Originally posted by fish81 at 2014-01-23 16:44:33
你是从什么样品中分离菌?第二次检测离第一次检测间隔了多久? 可能你的样品中的细菌由于某种情况(无营养成分了, 代谢物积累或者环境改变等)已经没有存活的了. 我们以前也出现过过两次检测的结果明显不一样的情况.

我从腌制鱼中分离菌,鱼一直放在4℃的冰箱里,真空包装着,第一次距离第二次隔了一个月,有长菌,可是都超过48小时了,基本过了三四天,而且相当少,就几个菌在平板上

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7楼2014-01-24 12:17:00
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kakarora

银虫 (初入文坛)

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4楼: Originally posted by 1550890759 at 2014-01-23 13:37:27
你是从哪提菌的?...

腌制鱼中

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8楼2014-01-24 12:18:44
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kakarora

银虫 (初入文坛)

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5楼: Originally posted by wyz5527 at 2014-01-23 15:25:42
继续培养,同时用摇瓶培养测试提取菌的活力。活力低培养时间长点,再就是你的菌怎样保存的,冷冻保存还是常温保存,冷冻保存要适当进行室温活化

4℃冰箱保存的,需要室温活化吗?怎么活化?就把样品搁在室温下一段时间?大约多久?

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9楼2014-01-24 12:20:28
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kakarora

银虫 (初入文坛)

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11楼: Originally posted by 1550890759 at 2014-01-24 12:41:50
你取样合理吗?应取不同部位混合在一起后均质。你第一次是如何取样的,取的哪个部位。或是第一次实验时有污染。
...

污染肯定没有,取得部位都一样的,但是就是不知道什么原因,现在就是不长菌,就是长也都三四天后了

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12楼2014-01-24 12:56:31
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银虫 (初入文坛)

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10楼: Originally posted by skull123 at 2014-01-24 12:38:10
1、可能样品的保存方式不对,而且腌制食物也相当于一个发酵过程,发酵的前中后期细菌菌群比例以及数量都是有差异的。虽然4摄氏度,发酵过程还是在缓慢的发生。如果要保持某个时期特定的菌群不发生改变最好还是-20或 ...

但是,我第一次提的时候,鱼就一直这么保存的,而且我已经真空保存,应该菌不会死的那么快吧,我就怕冷冻之后菌都死了,一直不敢保存

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13楼2014-01-24 12:59:54
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kakarora

银虫 (初入文坛)

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14楼: Originally posted by cz6633 at 2014-01-24 13:30:49
由于是腌制品,含盐量高,取样时是否考虑盐的影响。

我用无菌水,生理盐水都做了实验,第一次是生理盐水提取的,长菌了,还长得很好,不过之后几次不管是生理盐水也好还是无菌水都不长菌了,我也在培养基中添加了NaCl,情况比不添加还糟糕,一点菌的影子都看不到。
15楼2014-01-24 14:31:10
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银虫 (初入文坛)

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16楼: Originally posted by 青菜小虫 at 2014-01-24 15:38:14
菌液测OD值了吗?要不涂片镜检一下看看吧,是你要的菌吗?然后换营养琼脂培养基试试

没测,我不知道有什么菌,我要分离里面所有的菌,只要是里面的菌都是我要的,我用了四个培养基,连mrs都不长,菌液也都是现配现用的,应该不存在存放时间长的问题
17楼2014-01-24 18:51:58
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kakarora

银虫 (初入文坛)

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18楼: Originally posted by 青菜小虫 at 2014-01-24 22:37:54
你可以镜检一下看看有菌吗...

菌有,一个平板上就长几个,而且还是不同的菌,很奇怪的是,既然有菌,为什么每个菌只长一个,不能大量生长

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19楼2014-01-25 11:57:12
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