应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于cloning用的DNA polymerase，急~求助大侠们~~
51/1返回列表
查看: 1858  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

seo.d_park

木虫 (正式写手)

[求助] 关于cloning用的DNA polymerase，急~求助大侠们~~ 已有3人参与

一直在用rTaq (takara)的DNAPolymerase 做Cloning的 insert PCR 扩增，结果sequencing 后老是有4~5个mutation.
所以想换个DNA polymerase用用，目的扩增的DNA片段最大不到1Kb,听说Pfu Polymerase 好用，所以想用试试。
但是看这个说明书上Application写的适用于Blunt end form cloning,但是我用的enzyme是 stick enzyme,哪位大侠能告诉我得用什么Enzyme啊~
着急啊~！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-01-22 21:03:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

treetreew

木虫 (小有名气)
换高保真

粘性末端另外加
赞一下 回复此楼
9楼2014-01-26 10:24:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

DAX1

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-23 11:04:27
seo.d_park: 金币+1 2014-01-23 11:16:09
lataq,extaq,都是taq酶，扩增会有个a，应该符合你的要求
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-01-22 22:25:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zqybyy

木虫 (著名写手)

Dr

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-23 11:04:32
seo.d_park: 金币+1 2014-01-23 11:16:06
1. 降低Mg++离子浓度。
2. 减少PCR扩增循环数。
3. 提高退火温度。
4.更换Taq酶，若是末尾不加A的，可对产物加A处理。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-01-22 23:57:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-01-23 11:04:41
seo.d_park: 金币+3 2014-01-23 11:16:12
1kb片段的话，产生突变的几率不应该那么高，解决方案如下：
1）仍然使用常规的Taq酶，pcr时适当增加退火温度、降低循环次数；
2）使用高保真酶，如FastPfu，PCR后作加A尾处理，就可以做TA克隆了；有专门的加A试剂盒，或者增加一个加A步骤。
赞一下(1人) 回复此楼
做一个阳光、开朗的小和尚
4楼2014-01-23 09:38:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 青基如何破局 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +15 爱看书的可乐 2026-08-26 17/850 2026-08-27 17:25 by xxniao123
[基金申请] 基金不中，共勉 +10 eulota 2026-08-26 10/500 2026-08-27 17:23 by lqllinqiaoli
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +10 晴天加油 2026-08-26 11/550 2026-08-27 16:35 by msuhlx
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 02:01 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭