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dalaoguo8264

金虫 (小有名气)

[求助] 流式细胞仪测凋亡前,细胞样品制备的问题~! 已有2人参与

各位大虫们,我们最近做流式细胞检测细胞凋亡,重复多次都发现,空白对照组进行双染后,细胞凋亡率高达26%,而师妹拿我们同一批细胞同样做细胞凋亡,只是到其他实验室检测的,对照组凋亡率仅2-3%,师妹制备细胞样品的手法还是我们教的,为什么结果差这么远呢,我自己考虑还是制备细胞样品时手法问题占主要因素?
我们的是贴壁细胞,上机前将细胞悬浮,是不是这个过程中,消化时间太长?吹打次数过多?我们消化前用PBS冲洗2遍,用不含EDTA的胰酶消化,消化后将胰酶丢弃后,再用培养基中和吹打,这过程存在什么问题呢?
请教各位大虫,你们针对贴壁细胞检测凋亡前怎样制备细胞样品的呢?
另外,我们处理组的细胞凋亡率还是有趋势的,分别为38%,47%,53%.
流式细胞仪测凋亡前,细胞样品制备的问题~!
图片1.jpg

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:07 ]
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zhushengsheng

木虫 (著名写手)


137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2014-01-24 19:32:33
感觉你这个是beckmanFC500做的实验结果啊
2楼2014-01-24 16:57:58
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treetreew

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

说白了就是手法问题
消化,吹打,染色,都可能
题外话,趋势不错,ms再给个时间梯度应该更好
3楼2014-01-26 09:52:37
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浩子jerry

金虫 (正式写手)

(ˇˍˇ) 想~

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dalaoguo8264: 金币+3, 有帮助 2014-02-18 12:27:59
你说你师妹是在其他实验室测的是吧?我想你要检查下那个图上的“十字门”的位置是否一致,位置不同的话区间不一样,就会有影响的,还有就是最好及时检测,避光,时间长了或遇到光荧光会猝灭的,祝您好运!
嘎嘎
4楼2014-02-17 21:39:27
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