24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 868  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zwjxyzcl

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR测序 已有4人参与

小弟想克隆基因的CDS区 长约3000bp 设计了引物24nt长度 BLAST也没见特异性 克隆的产物位置我看挺对的 但克隆到T载体送测序(正向)测序结果blast下却发现并不是目的条带  克隆到T载体后我跑过电泳 也确定是连上去了 怎么会这样呢 要说引物设计不好吧 但P全长的话本身引物就比较受限 想问下各位虫子如何是好。。。。。好伤 感觉不会再爱了
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你在你克隆的片段里再做一个巢式PCR确定一下是不是你所需要的目的片段。你多合成些引物克隆目的片段。
hehe
5楼2014-01-21 08:09:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-20 16:03:00
克隆后连到T载体上的序列没有所谓的正向反向,所以你测序的结果最后给反向互补一下,再同时进行序列比对。你难道不知道你的基因序列,用的是简并引物进行的克隆?
2楼2014-01-20 15:40:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
也可能是测序引物用错了吧  我以前遇到过一次
3楼2014-01-20 17:25:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
T-载体克隆两个方向都有可能的,你可以用T载体通用引物测序,这样可以确定目的片段连上去的方向。
4楼2014-01-21 04:07:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 295求调剂 +3 ?要上岸? 2026-04-05 4/200 2026-04-10 18:48 by chemisry
[考研] 一志愿东北大学控制工程085406数二英二385,求调剂 +6 Ezra_Zhang 2026-04-09 6/300 2026-04-10 16:23 by 高维春
[考研] 一志愿华东师范生物学326分,求调剂 +8 刘墨墨 2026-04-09 8/400 2026-04-10 12:00 by pengliang8036
[考研] 080100力学316求调剂 +7 L_Hairui 2026-04-07 7/350 2026-04-10 09:45 by vgtyfty
[考研] 268分085602化学工程调剂 +24 月照花林。 2026-04-09 24/1200 2026-04-10 08:09 by Sammy2
[考研] 一志愿 江南大学 085602 化工专硕 338分求调剂 +16 路痴小琪 2026-04-05 16/800 2026-04-10 08:08 by kangsm
[考研] 0703化学调剂325分 +13 15771691647 2026-04-04 15/750 2026-04-09 16:55 by 15771691647
[考研] 262求调剂 +10 天下第一文 2026-04-04 13/650 2026-04-09 15:16 by 探123
[硕博家园] 新一代电子信息294求调剂 不挑学校 +5 Ytyt11 2026-04-09 6/300 2026-04-09 14:40 by Ytyt11
[考研] 化学308分求调剂 +21 你好明天你好 2026-04-07 23/1150 2026-04-08 22:32 by 凯凯要变帅
[考研] 266调剂 +8 daya sun 2026-04-07 9/450 2026-04-08 20:27 by yutian743
[考研] 336求调剂,一志愿中科大 +9 墨彧 yuyu 2026-04-06 9/450 2026-04-08 11:24 by 想读书的菌菌
[考研] 287求调剂 +6 Fnhc 2026-04-07 6/300 2026-04-08 10:05 by xingguangj
[考研] 求调剂 +11 wwwwabcde 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:16 by JourneyLucky
[考研] 346分的生物与医药08600求调剂 +6 常雨阳上岸 2026-04-05 7/350 2026-04-06 12:36 by lys0704
[考研] 考研调剂 +5 美丽的youth_ 2026-04-04 6/300 2026-04-06 06:57 by houyaoxu
[考研] 求调剂到0856材料工程 +3 程9915 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:15 by 蓝云思雨
[考研] 08专硕275调剂 +5 AaAa7420 2026-04-05 5/250 2026-04-05 18:01 by jkddd
[考研] 工科求调剂 +15 11ggg 2026-04-03 15/750 2026-04-05 16:24 by zzx2138
[考研] 268求调剂 +8 你好tg 2026-04-03 9/450 2026-04-04 05:08 by gswylq
信息提示
请填处理意见