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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » Live/Dead Baclight Bacterial Viability Kit 显微镜看活菌/死菌，细菌乱动无法照相
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rzhdw

铜虫 (小有名气)

[求助] Live/Dead Baclight Bacterial Viability Kit 显微镜看活菌/死菌，细菌乱动无法照相 已有4人参与

如题，应该是细菌随着玻片上的液体移动。我用5ul染色菌液，18mm*18mm盖玻片压片。尝试将压片体积从1ul改变到10ul，结果都一样动的厉害，拍出来的照片基本上就是一条细菌运动轨迹。。。有没有做这个的同学，交流一下吧
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1楼 2014-01-17 20:56:47
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xielisherry

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

最近也在做live/dead 染色，但是所有菌既被染成了红色又被染成了绿色，请问有谁知道是怎么回事？有哪位有经验的大神能给个染色步骤教程什么的么，万分感谢
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13楼2014-05-27 11:27:05
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rzhdw

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by skull123 at 2014-01-17 23:18:28
有这样子么？直接点菌液在载玻片上，用酒精灯火微微烘烤干，再染色，再拍照不好么？

多谢回复！我用的染料是跟细胞膜通透性有关的，细胞膜完整的细菌只能通过绿色染料被染成绿色，而细胞膜损坏的细菌则可以通透红色染料呈现红色。如果用酒精灯烤干的话恐怕细胞膜早就坏掉了。。。
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5楼2014-01-19 11:55:40
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普通回帖

skull123

木虫 (正式写手)
有这样子么？直接点菌液在载玻片上，用酒精灯火微微烘烤干，再染色，再拍照不好么？
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2楼2014-01-17 23:18:28
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skull123

木虫 (正式写手)
而且如果要观看细菌，肯定要用到油镜，如果里面是液体，而且有盖玻片，油镜肯定会压迫盖玻片，导致中心发生形变，液体向四周扩散
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3楼2014-01-17 23:20:48
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定军山貔貅

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by skull123 at 2014-01-17 23:20:48
而且如果要观看细菌，肯定要用到油镜，如果里面是液体，而且有盖玻片，油镜肯定会压迫盖玻片，导致中心发生形变，液体向四周扩散

可以用吸水纸吸干多余水，这样盖片就不会乱动了

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越努力越幸运
4楼2014-01-18 01:11:51
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rzhdw

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by skull123 at 2014-01-17 23:20:48
而且如果要观看细菌，肯定要用到油镜，如果里面是液体，而且有盖玻片，油镜肯定会压迫盖玻片，导致中心发生形变，液体向四周扩散

多谢你的回复！我没有用油镜，用的是Leica的荧光显微镜，40x物镜，可能因为是荧光，所以相对灵敏一些，从目镜可以清晰看到细菌的荧光，但就是动的太厉害，无法拍照
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6楼2014-01-19 11:57:51
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rzhdw

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 定军山貔貅 at 2014-01-18 01:11:51
可以用吸水纸吸干多余水，这样盖片就不会乱动了
...

多谢！可是我只加了5ul菌液压片，液体并没有溢出盖玻片。而且也尝试了更少菌液压片，都不行。。。好纠结
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7楼2014-01-19 11:59:51
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skull123

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by rzhdw at 2014-01-19 11:55:40
多谢回复！我用的染料是跟细胞膜通透性有关的，细胞膜完整的细菌只能通过绿色染料被染成绿色，而细胞膜损坏的细菌则可以通透红色染料呈现红色。如果用酒精灯烤干的话恐怕细胞膜早就坏掉了。。。...

先染色，在固定，在拍照？
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8楼2014-01-19 14:58:09
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skull123

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by rzhdw at 2014-01-19 11:55:40
多谢回复！我用的染料是跟细胞膜通透性有关的，细胞膜完整的细菌只能通过绿色染料被染成绿色，而细胞膜损坏的细菌则可以通透红色染料呈现红色。如果用酒精灯烤干的话恐怕细胞膜早就坏掉了。。。...

先等一段时间，等一段时间细菌染色后，该成绿色的是绿色，该成红色的成红色了，再热固定了拍照？这样不成吗？
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9楼2014-01-19 15:00:54
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rzhdw

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by skull123 at 2014-01-19 15:00:54
先等一段时间，等一段时间细菌染色后，该成绿色的是绿色，该成红色的成红色了，再热固定了拍照？这样不成吗？...

热固定的话所有的菌都会变成红色了。。。为啥看别人文章上的图拍的那么清楚呢。。。
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10楼2014-01-19 20:49:18
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