24小时热门版块排行榜    

查看: 3371  |  回复: 21

XOooZzz

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
杨玉焕123: 金币+16, 有帮助 2014-03-04 10:36:24
引用回帖:
20楼: Originally posted by 杨玉焕123 at 2014-03-04 09:42:00
不好意思,再打扰一下,你写的第二步中用的是氯仿?不是酚仿?还有用75%乙醇洗涤时,体积大概是多少呢?谢谢哈...

哦,写错了,是氯仿异戊醇。没用过酚。
我在200 uL PCR管里操作,加几十到100 uL乙醇吧。PCR管套到0.5 mL离心管再套到1.5 mL离心管里再去离心。

你这是要做载体单酶切去磷酸化吗?有些限制酶的buffer和CIP是兼容的,譬如Thermo的fast digest。我是用Thermo的快酶,20uL 体系37度酶切反应半小时后,直接加Takara的cip 0.5~1 uL,继续37度反应1小时,高温失活,跑胶回收。这样就省下一个回收步骤了。
21楼2014-03-04 10:22:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨玉焕123

木虫 (小有名气)

阳光

引用回帖:
21楼: Originally posted by XOooZzz at 2014-03-03 14:22:52
哦,写错了,是氯仿异戊醇。没用过酚。
我在200 uL PCR管里操作,加几十到100 uL乙醇吧。PCR管套到0.5 mL离心管再套到1.5 mL离心管里再去离心。

你这是要做载体单酶切去磷酸化吗?有些限制酶的buffer和CIP是兼 ...

嗯,我用的是宝生物的BamH 1单酶切,载体是pet28a,酶切4-6h,酶切后有时还有环状的,所以都是切胶回收,然后用Takara的CIAP去磷酸化,再与酶切后的DNA连接、转化,谢谢你哈
22楼2014-03-04 10:36:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 杨玉焕123 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +12 enenenhui 2026-03-13 13/650 2026-03-16 08:30 by Linda Hu
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +4 Liwangman 2026-03-15 4/200 2026-03-16 08:01 by wang_dand
[考研] 0703化学调剂,求各位老师收留 +7 秋有木北 2026-03-14 7/350 2026-03-15 17:30 by 小物理化学
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-15 3/150 2026-03-15 09:12 by JourneyLucky
[考研] 268求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-14 6/300 2026-03-14 22:20 by 运气yunqi
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工材料求调剂(有希望2吗?) +3 mysdl 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:53 by JourneyLucky
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-09 6/300 2026-03-14 02:14 by JourneyLucky
[考研] b区环境工程求调剂 +4 Maps1 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:23 by JourneyLucky
[考研] 318求调剂 +3 李新光 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:21 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +4 快乐的香蕉 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 26考研求调剂 +5 丶宏Sir 2026-03-13 5/250 2026-03-13 13:05 by JourneyLucky
[考研] 282分材料专业求调剂院校 +18 枫桥ZL 2026-03-09 25/1250 2026-03-13 10:47 by 白夜悠长
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 283求调剂,材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
信息提示
请填处理意见