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[交流]
免疫共沉淀coIP寻找受体
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我用GST的标签融合表达一个目的蛋白，可是挂不上GST-AGROSE，于是我又用HIS融合表达了蛋白，用的载体是共表达载体pETDuet-1，在两个MCS中各插了一个ORF,共表达两个蛋白。 随后我用Ni-NTA agrose做了蛋白纯化，很遗憾，有杂带，我考虑会影响接下来的IP。我是用外源蛋白去拉内源蛋白，外源蛋白就是从细菌表达系统中纯化的蛋白，我也考虑过你之前说的HIS做可能假阳性太多，可是我只能用anti-HIS来做桥梁，看能不能做出Co-IP,内源蛋白是昆虫细胞裂解液上清。我的目的是看纯化的蛋白和细胞裂解液会不会有相互作用。这涉及到毒素蛋白受体的钓取，这方面的研究论文有很多，大多是做验证。不巧的是，我用protein A/G没有拉下蛋白，连重链和轻链也没有。 请帮我看看，我不知道接下来要怎么做了。 |
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