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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫共沉淀coIP寻找受体
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seasonin

银虫 (小有名气)

[交流] 免疫共沉淀coIP寻找受体

我用GST的标签融合表达一个目的蛋白，可是挂不上GST-AGROSE，于是我又用HIS融合表达了蛋白，用的载体是共表达载体pETDuet-1，在两个MCS中各插了一个ORF,共表达两个蛋白。
随后我用Ni-NTA agrose做了蛋白纯化，很遗憾，有杂带，我考虑会影响接下来的IP。我是用外源蛋白去拉内源蛋白，外源蛋白就是从细菌表达系统中纯化的蛋白，我也考虑过你之前说的HIS做可能假阳性太多，可是我只能用anti-HIS来做桥梁，看能不能做出Co-IP,内源蛋白是昆虫细胞裂解液上清。我的目的是看纯化的蛋白和细胞裂解液会不会有相互作用。这涉及到毒素蛋白受体的钓取，这方面的研究论文有很多，大多是做验证。不巧的是，我用protein A/G没有拉下蛋白，连重链和轻链也没有。
请帮我看看，我不知道接下来要怎么做了。
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1楼 2014-01-14 11:18:02
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llfxcy

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做抗体，用抗体去pulldown

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-01-14 12:13:10
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seasonin

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by llfxcy at 2014-01-14 12:13:10
做抗体，用抗体去pulldown

那何必用抗体呢？用HIS-agrose做pulldown不也一样吗？
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4楼2014-01-14 16:52:59
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l4191100283楼
2014-01-14 12:17   回复  
seasonin5楼
2014-01-14 16:53   回复  
引用回帖:
3楼: Originally posted by l419110028 at 2014-01-14 12:17:12

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