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huangsz997

铜虫 (小有名气)

[求助] 表达抗虫蛋白没活性，想确定表达没出错，可以对包涵体蛋白测序吗？ 求指教，谢谢 已有2人参与

做抗虫蛋白的表达，最近知道抗虫活性实验结果不理想，诱导的蛋白在sds-page上与预期大小一致。现在想对蛋白测序来确定表达了目的蛋白，蛋白在包涵体中，可以用包涵体拿去测序吗？有了解的吗，本人对蛋白测序一点不清楚 求指教……谢谢
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1楼 2014-01-12 12:34:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-12 18:51:07
蛋白测序是在变性条件下的，与是否有活性无关。
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2楼2014-01-12 17:23:49
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huangsz997

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-12 17:23:49
蛋白测序是在变性条件下的，与是否有活性无关。

谢谢你的回答。前两天给蛋白测序公司打电话，他说得把蛋白溶在溶剂中，并且样品浓度也有要求，我的样品只有在包涵体时的浓度符合他的要求，如果变性再复性远远达不到他的测序要求浓度……
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3楼2014-01-22 09:39:19
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by huangsz997 at 2014-01-22 09:39:19
谢谢你的回答。前两天给蛋白测序公司打电话，他说得把蛋白溶在溶剂中，并且样品浓度也有要求，我的样品只有在包涵体时的浓度符合他的要求，如果变性再复性远远达不到他的测序要求浓度……...

你可以用SDS蛋白上样buffer溶解，SDS有很强的增溶作用，应该能达到需要的浓度。
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4楼2014-01-26 09:49:40
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

想看看表达的蛋白是否有问题，测序应该是可以的。但是你在做重组质粒时，DNA序列没问题应该ok的。真要看得到的是否是你要的蛋白，建议直接wester，同时做个MS，两个实验都是1天能够完成的，快速，准确。
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5楼2014-01-26 12:28:21
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