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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 急急急！！western 半干转膜屡次失败，求大神救命！
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janelnnq

铁虫 (初入文坛)

[求助] 急急急！！western 半干转膜屡次失败，求大神救命！已有5人参与

最近做了4次western转膜，都失败了，求大神帮帮我吧~~快崩溃了~
仪器：biorad semi-dry cell
目的蛋白：100KD左右，用的预染（30-230KD）marker，其中有一条80KD的红色marker。
问题：用的biorad的厚滤纸，师姐说中间还要加层薄滤纸，所以最中的三明治是厚海绵-薄滤纸-0.44 PVDF膜-薄滤纸-厚海绵，半干条件下15V，30min，看到大部分的条带都转到厚海绵上了，薄滤纸上很干净，膜上看不清条带，丽春红预染后看不见有什么条带。
后来又跑了一块胶，15V,20min，结果发现红色条带以上的都还在胶上，底部的厚海绵上仍旧可以看到模糊的marker条带。请问大神这是转过了，还是还没转上呢？前后就差10min，半干转的这么快吗？我们实验室师姐跑的40KD，同样仪器说是用了40min,为什么我这蛋白比较大反而转的比较快呢？实在想不明白~~
本人菜鸟，许多条件都太熟，什么都得自己摸，求帮助呀~~
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1楼2014-01-11 18:57:56
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janelnnq

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by janelnnq at 2014-01-21 08:59:52
谢谢，我做了几次还是不行，不知道为什么每次都是预染的marker跑到滤纸上，刚开始觉得是不是预染的marker染料脱掉了，但师姐说不太可能，再不行就转成wet的～
...

这个功率有计算方法吗？大概是什么样的合适呢～～我查的时候没看到有说这方面的，请楼主指教～～

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2014-01-21 09:01:52
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janelnnq

铁虫 (初入文坛)
三明治膜上层忘记打上胶了~
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2楼2014-01-11 18:59:08
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yyshpy007

禁虫 (正式写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2014-01-12 07:49:13
本帖内容被屏蔽
3楼2014-01-11 19:55:10
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janelnnq

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yyshpy007 at 2014-01-11 19:55:10
100kd蛋白转不到半小时，时间太短了吧，电压那么小，你查查大家的经验电压和时间吧，我们都常用湿转，要120V 2小时呢

是，我也觉得很奇怪，但是半干确实要求电压比较小~大家都是wet做的比较多，貌似semi-dry的经验帖不多~
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4楼2014-01-11 22:32:08
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