应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物设计
51/1返回列表
查看: 1128  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

laisforever

银虫 (小有名气)

[求助] 引物设计 已有4人参与

小妹现在在做质粒构建方向，现在涉及引物序列的问题，引物要求有引物+酶切位点+无用序列，
我就想问一下无用序列，它代表什么，是统一的吗？希望大虾指导一下
回复此楼

» 猜你喜欢
人生在世，俯仰之间，唯有追求卓越，但求尽其所能.
1楼 2014-01-09 15:10:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-09 17:14:30
laisforever: 金币+2, ★★★很有帮助, 保护碱基的前后必须是相匹配的吗？就像AGT-酶切位点-ACT，要这样嘛，还是前后可以随意 2014-01-10 13:05:58
你所谓的无用碱基可能是保护碱基，为了保证内切酶正常切割所加的序列，设计一般没有太严格要求，我们实验室一般根据GC含量加上5个碱基。有人也试过不加，效果也可以。
赞一下 回复此楼
hehe
4楼2014-01-09 16:10:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

guojndx

金虫 (小有名气)

生物催化小虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-09 17:14:17
laisforever: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-01-10 13:06:45
你说的无用序列是保护碱基吧，保护碱基一般是三个以上，以保证PCR产物酶切的正常进行，具体没有特定的序列要求，但要保证不能与引物其他位置形成发夹结构。也有人做了不同酶切位点的保护碱基表，这个网上可以下载，希望对你有所帮助。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-01-09 15:41:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-09 17:14:23
laisforever: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-01-10 13:06:25
无用序列就是保护碱基，双链DNA末端不是良好的双螺旋结构，多少会散开一点。设计保护碱基是为了使酶切位点处于DNA靠里一点的位置而形成好一点的DNA双螺旋结构，进而提高酶切效率。

如果不设计保护碱基，酶切效率会降低，有时甚至切不开。

至于用什么样的保护碱基，要看你用什么样的酶切位点。不同的酶切位点用不同的保护碱基，网上都能下到的。
赞一下 回复此楼
3楼2014-01-09 15:45:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liushicai226

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
无用序列是是保护碱基，大多数限制酶对裸露的酶切位点不能切断，必须在酶切位点旁边加上一个至几个保护碱基，才能使所定的限制酶对其识别位点进行有效切断，具体什么样的酶切位点加什么碱基，这有个酶切位点保护碱基表，可以参考一下。
祝实验顺利！
赞一下 回复此楼
用执着，敲开梦想的大门
5楼2014-01-10 10:22:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上意见出来了 +4 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 4/200 2026-08-29 14:06 by Jacob678
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 14:02 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 9/450 2026-08-29 09:59 by jklily
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +3 德尚中行 2026-08-27 3/150 2026-08-28 15:24 by rongshuxia
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭