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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 植物gDNA为模板，PCR前几次出现清晰条带，后面出现涂抹型条带是什么原因？
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LYSH1103

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ruikun at 2014-01-09 16:57:28
请问楼主问题解决了吗？我最近也出现了这样的问题，很需要指点啊!!

没有啊 ，，，仍在努力中。。。我希望年前可以解决啊。。因为我想回家 。。。
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11楼2014-01-11 20:59:48
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漫天雪涯

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
LYSH1103: 金币+1, ★★★很有帮助, 金币不够分啦。。谢谢。。嘎嘎 2014-01-14 09:49:26
我带的本科生有一次把TAE缓冲液加成水，跑出来就是第二种样子。
如果不是缓冲液加错的话，可能就是里面有杂质，特别是蛋白之类的。
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12楼2014-01-11 21:03:37
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
LYSH1103: 金币+1, ★★★很有帮助, 金币不够啦。。谢谢。吱吱 2014-01-14 09:50:05
我做大麦gDNA也是这种情况，老是P不出来后来换了PCR buffer好了，建议你DNA总量在200ng左右。再一个换新primer。
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hehe
13楼2014-01-11 21:32:39
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
9楼: Originally posted by LYSH1103 at 2014-01-11 20:42:08
我在提取DNA的时候已经用过RNase A .其他杂质这个就。。。难弄啦。。。。我用的是降落式PCR程序，55-65度，还要再低点吗？出现问题后我也试过45-55度和50-60度。酶有结果啊。镁离子这个我倒是没有提高。因为我觉得 ...

PCR时可以用以前提出来的WT模板做阳性对照，看看是不是体系的问题。
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14楼2014-01-12 02:29:21
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LYSH1103

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-01-11 21:32:39
我做大麦gDNA也是这种情况，老是P不出来后来换了PCR buffer好了，建议你DNA总量在200ng左右。再一个换新primer。

20天，好几管buffer 都用没有了。我在这一段已经合了3对引物了，开始都很好，之后就都是一个样子了。片段基本在900-1300bp。我昨天又合了一对。看看这对的结果吧。期待能解决掉。我想回家啦。。
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15楼2014-01-13 09:19:01
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llp032267

新虫 (初入文坛)
我想问一句，问题解决了吗？遇到了同样的问题

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16楼2017-12-07 20:34:45
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