| 查看: 1336 | 回复: 10 | ||||
| 当前主题已经存档。 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
寻找感受态制备的好方法
|
||||
|
最近我们实验室的感受态细胞一直都做的不好，最可怕的就是现做现用还可以 ，但是一放到-70度冰箱再拿出来使用就不行了，连原质粒转化都不长斑。不知道到底是什么原因，我们用了氯化钙法。和网上找的一种TSB法，都是一样，而且用TSB法的DH5a菌落长的特别的小。 哪位大虾能有好的，实验室已经用了很久的感受态制备protocol能教我一下吗？谢谢啊！ [search]感受态[/search] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 实验求助 |
» 猜你喜欢
FileCode能看出啥？
已经有15人回复
-
filecode
已经有8人回复
-
确定了，国自然21号放榜
已经有7人回复
-
帮忙看看fileCode
已经有5人回复
-
综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？
已经有11人回复
-
关于代码变化问题，想知道的进来
已经有24人回复
-
为什么网上很多人说本周 12号出结果
已经有3人回复
-
静等基金结果
已经有16人回复
-
我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人
已经有11人回复
-
关于Filecode分析方法
已经有3人回复
mascotte
金虫 (正式写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 1998.9
- 红花: 3
- 帖子: 328
- 在线: 193.4小时
- 虫号: 492008
- 注册: 2008-01-07
- 专业: 生物化学
8楼2008-01-10 19:53:42
yufuxian
木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6334.1
- 散金: 1000
- 红花: 1
- 帖子: 1476
- 在线: 174.8小时
- 虫号: 456093
- 注册: 2007-11-11
- 专业: 兽医免疫学
2楼2008-01-09 00:01:16
lihuanzheng
铜虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 24.5
- 帖子: 487
- 在线: 114.7小时
- 虫号: 483448
- 注册: 2007-12-26
- 性别: GG
- 专业: 遗传学研究新技术与方法
3楼2008-01-09 01:16:53
自己用过，感觉挺好！
★ ★
asr(金币+2,VIP+0):thanks.辛苦了!
asr(金币+2,VIP+0):thanks.辛苦了!
|
Prepare competent cell(1) 1. Pick a single colony of E.coli cells into 4~5 l LB at 37℃ shaking 250 rpm overnight(15~16 h).(or 1:1000, E.coli : LB) for example: 5ul E.coli for 5 ml LB. 2. 100 ml +2ml overnight E.coli culture at 37℃ shaking 2 h.(about OD=0.4) 3. Aliquot separate culure into two 50 ml prechilled sterile polypropylene tubes and leave the tube on ice 5~10 min. centrifuge cells 7 min 3000 rpm, 4℃. 4. Resuspend(gently) each pellet in 10 ml ice-cold 0.1M Cacl2 solution. Centrifuge 5 min at 3400 rpm(1100 g), 4℃. 5. Resuspend each pellet in 10 ml ice-cold 0.1M Cacl2 solution. Keep resuspended cells on ice for 30 min. centrifuge 5 min at 1100 g, 4℃. 6. Resuspend each pellet completely in 4 ml of ice-cold Cacl2 solution, Aliquot 200 ul into prechilled, sterile polypropylene tubes. Freeze immediately at 4℃(last two weeks for using). Or add glycerol at 15% final concentration, freeze immediately at -70℃(last several month for using). For example: 3 ml Cacl2-E.coli with 1 ml 50% glycerol. |
4楼2008-01-09 21:04:23
100