应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化问题
91/1返回列表
查看: 763  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jonew

木虫 (正式写手)

[求助] 转化问题 已有4人参与

近期，在做转化，目标片段3090，转化到PMD19-T中，链接过夜 4度，涂板，长的满满的单菌落，但是不长蓝斑，最主要的是 挑斑后也可以摇起来，但是菌液PCR，怎么也P不出来了，WHY，郁闷中，求大神，搭救中。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢
借口很贱，，，
1楼 2013-12-31 12:07:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-31 14:16:20
蓝白斑筛选要做对照，特别是没有蓝斑的时候。比方说转一个pUC19这样的质粒。
菌可以摇起来只说明有氨苄抗性，很可能是空载体。PCR用的是载体上的通用引物吗？P不出来的原因可能有多种。一个是本身没有插入，此外还可能PCR体系建立不正确，菌液过多等。需要分别设立对照来说明。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-12-31 13:05:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-31 14:16:34
首先问个问题，所谓的目标片段，用什么方法纯化的，切胶回收的，还是纯化的，我怀疑是连上的都是杂带，因为你做的片段比较长，按说白斑应该长得很少，全是篮斑比较正常。也建议你如楼上所说，做蓝白筛选的对照组，要确定其他克隆能出现篮斑。
赞一下 回复此楼
3楼2013-12-31 13:37:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jonew

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yujiaping1 at 2013-12-31 13:37:32
首先问个问题，所谓的目标片段，用什么方法纯化的，切胶回收的，还是纯化的，我怀疑是连上的都是杂带，因为你做的片段比较长，按说白斑应该长得很少，全是篮斑比较正常。也建议你如楼上所说，做蓝白筛选的对照组，要 ...

片段是胶回收的

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
借口很贱，，，
4楼2013-12-31 15:21:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liu2883508

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-31 23:56:04
jonew: 金币+10 2014-01-01 14:01:44
我觉得应该是你的抗生素过期了~或者药品的问题，因为菌液能长，P不出来，很有可能抗生素的问题~
赞一下 回复此楼
人生就是要不断的前进，忘掉不好的，记住好的向前行
5楼2013-12-31 17:18:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jonew

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liu2883508 at 2013-12-31 17:18:00
我觉得应该是你的抗生素过期了~或者药品的问题，因为菌液能长，P不出来，很有可能抗生素的问题~

做了对照，一个涂AMP一个不涂，直接涂板感受态，加AMP的不长，不加AMP的长的很多。。。抗生素应该没有事吧？感受态是新买的
赞一下 回复此楼
借口很贱，，，
6楼2013-12-31 18:52:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
6楼: Originally posted by jonew at 2013-12-31 18:52:59
做了对照，一个涂AMP一个不涂，直接涂板感受态，加AMP的不长，不加AMP的长的很多。。。抗生素应该没有事吧？感受态是新买的...

建议LZ直接提个质粒看看，做什么菌液PCR啊,你的目标片段3000多要是连上肉眼都能看到，都不用蓝白斑筛选，随机挑几个就行
赞一下(1人) 回复此楼
大家相互帮助哈
7楼2014-01-01 00:14:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jonew

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-01-01 00:14:33
建议LZ直接提个质粒看看，做什么菌液PCR啊,你的目标片段3000多要是连上肉眼都能看到，都不用蓝白斑筛选，随机挑几个就行...

嗯嗯

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
借口很贱，，，
8楼2014-01-01 12:54:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

787719259

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-31 13:05:51
蓝白斑筛选要做对照，特别是没有蓝斑的时候。比方说转一个pUC19这样的质粒。
菌可以摇起来只说明有氨苄抗性，很可能是空载体。PCR用的是载体上的通用引物吗？P不出来的原因可能有多种。一个是本身没有插入，此外还 ...

想知道LZ现在做得怎么样了，我也是菌液pcr一直没有p出来过
赞一下 回复此楼
9楼2016-03-30 20:37:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jonew 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 291分工科求调剂 +8 science饿饿 2026-03-01 9/450 2026-03-01 14:22 by Ducount.Y
[考研] 0805总分292，求调剂 +3 幻想之殇 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:11 by yc258
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +4 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 4/200 2026-03-01 13:15 by wang_dand
[考研] 272求调剂 +5 材紫有化 2026-02-28 5/250 2026-03-01 11:51 by gaoxiaoniuma
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +3 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 6/300 2026-03-01 11:50 by gaoxiaoniuma
[考研] 材料类求调剂 +8 wana_kiko 2026-02-28 8/400 2026-03-01 11:44 by 王伟要上岸啊
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 高分子化学与物理调剂 +5 好好好1233 2026-02-28 9/450 2026-03-01 10:59 by fengyu211
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[考研] 272求调剂 +4 田智友 2026-02-28 4/200 2026-03-01 06:43 by 刘兵
[考研] 285求调剂 +6 满头大汗的学生 2026-02-28 6/300 2026-03-01 06:29 by Trying]
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +4 弗格个 2026-02-28 6/300 2026-02-28 22:00 by wang_dand
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭