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xin641685388

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 关于一对引物同时扩增多个不同基因的问题已有1人参与

请教大家谁知道怎么设计一对引物同时去扩增多个不同基因呀，这多个基因是来自于同一基因组DNA的，引物特异性不用很好，只要扩增的目的片段里面有这几个基因的片段就可以，求助呀，请问大家谁知道这个引物要去怎么设计，需要什么软件吗？谢谢啦！

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1楼 2013-12-29 19:25:21

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gyl121

新虫 (正式写手)

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引用回帖:

8楼: Originally posted by xin641685388 at 2014-01-07 15:52:23
可是现在关键是这5个基因一比对基本没有什么同源性，我设计了三对不同长度的（7bp/10bp/12bp）的简并引物，这些引物都是3‘端的5个碱基能够和这5个基因互补配对，5’端分别加了2/5/7个简并碱基，设计完后Tm值太低了 ...

我的意思是，你可以不用同一条引物，把他们全部扩出来，将5个，分成3个和3个序列比，或者再多些（自己选择重复的），因为2,3个序列比与5个序列比的同源性会有很大的差异的，不要想着一步就成，然后温度尽量往50度设计，实在不好加，就搞到40度左右也应该的，会有多态性的影响罢了