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mtz0305

金虫 (小有名气)

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虫号: 2021765

[交流] 自杀质粒

各位大虫：
我最近想做自杀质粒的实验，我现在有些困惑向大家请教一下：目前我还没有自杀质粒，需要构建，考虑的转导方式有种：电转和结合转移。（1）若用电转化的话是不是质粒上就没有必要有oriT了，直接找一个普通的大肠窄宿主质粒，加上抗性和同源片段就可以了？其实我不太理解，质粒进去以后会不会被宿主的酶切成碎片，还有就是进行同源重组的时候是什么力量让质粒变成线性的。（2）结合转移，自杀质粒的oriT是不是只有和辅助质粒的oriT一样才能实现转移？用同一个群的其他转移质粒可以吗？

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1楼 2013-12-24 10:15:56

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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虫号: 1614001

★ ★ ★ ★
mtz0305(金币+1): 谢谢参与
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-25 12:13:30

1. 是。DNA进入宿主后是否在重组前被切割取决于宿主的核酸内切酶活性，不同的宿主核酸内切酶的活性不同，所以有些宿主不易转化。不是很清楚如何使超螺旋质粒线性化，通常转化线性化的质粒的同源重组效率会更高。
2. 每一类OriT有各自特异的nickase识别并切割，你构建的质粒上的OriT不一定完全一样，但要与helper中的序列是同一类型。