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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 自杀质粒
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mtz0305

金虫 (小有名气)

[交流] 自杀质粒

各位大虫：
我最近想做自杀质粒的实验，我现在有些困惑向大家请教一下：目前我还没有自杀质粒，需要构建，考虑的转导方式有种：电转和结合转移。（1）若用电转化的话是不是质粒上就没有必要有oriT了，直接找一个普通的大肠窄宿主质粒，加上抗性和同源片段就可以了？其实我不太理解，质粒进去以后会不会被宿主的酶切成碎片，还有就是进行同源重组的时候是什么力量让质粒变成线性的。（2）结合转移，自杀质粒的oriT是不是只有和辅助质粒的oriT一样才能实现转移？用同一个群的其他转移质粒可以吗？   
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1楼 2013-12-24 10:15:56
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
mtz0305(金币+1): 谢谢参与
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-25 12:13:30
1. 是。DNA进入宿主后是否在重组前被切割取决于宿主的核酸内切酶活性，不同的宿主核酸内切酶的活性不同，所以有些宿主不易转化。不是很清楚如何使超螺旋质粒线性化，通常转化线性化的质粒的同源重组效率会更高。
2. 每一类OriT有各自特异的nickase识别并切割，你构建的质粒上的OriT不一定完全一样，但要与helper中的序列是同一类型。
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16楼2013-12-24 13:21:01
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)
★
mtz0305(金币+1): 谢谢参与
blessing
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17楼2013-12-24 13:43:50
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luzhouyue

铜虫 (初入文坛)
★
mtz0305(金币+1): 谢谢参与
弱弱地问一句，自杀质粒是自己消灭自己还是消灭寄主细胞
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18楼2013-12-24 23:04:55
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mtz0305

金虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by luzhouyue at 2013-12-24 23:04:55
弱弱地问一句，自杀质粒是自己消灭自己还是消灭寄主细胞

要么被宿主消化掉，要么整合到染色体上，随宿主一起复制
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19楼2013-12-24 23:15:14
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mtz0305

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-24 13:21:01
1. 是。DNA进入宿主后是否在重组前被切割取决于宿主的核酸内切酶活性，不同的宿主核酸内切酶的活性不同，所以有些宿主不易转化。不是很清楚如何使超螺旋质粒线性化，通常转化线性化的质粒的同源重组效率会更高。
2 ...

谢谢
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20楼2013-12-24 23:16:14
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289363400

铁杆木虫 (知名作家)
★
mtz0305(金币+1): 谢谢参与
长知识了
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22楼2013-12-25 11:51:56
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haixiawu2楼
2013-12-24 10:20   回复  
mtz0305(金币+1): 谢谢参与
yfzjk3楼
2013-12-24 10:24   回复  
mtz0305(金币+1): 谢谢参与
宋全伟4楼
2013-12-24 10:25   回复  
mtz0305(金币+1): 谢谢参与
， [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
virologik5楼
2013-12-24 10:29   回复  
mtz0305(金币+1): 谢谢参与
Spinage6楼
2013-12-24 10:36   回复  
mtz0305(金币+1): 谢谢参与
顶
boyuehu7楼
2013-12-24 10:39   回复  
mtz0305(金币+1): 谢谢参与
qqllqq8楼
2013-12-24 10:40   回复  
mtz0305(金币+1): 谢谢参与
slz20089楼
2013-12-24 10:46   回复  
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userhung10楼
2013-12-24 10:50   回复  
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wlxiao11楼
2013-12-24 10:53   回复  
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qqaoqq12楼
2013-12-24 10:55   回复  
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doctorbang13楼
2013-12-24 10:58   回复  
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jiechen14楼
2013-12-24 11:06   回复  
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1
假大空15楼
2013-12-24 11:10   回复  
mtz0305(金币+1): 谢谢参与
neu23421楼
2013-12-25 09:14   回复  
mtz0305(金币+1): 谢谢参与
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