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dgm1208

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[求助] 链霉菌基因组DNA的大提

我有几株链霉菌想要提取基因组DNA后做杂交，大提DNA的方法是改良的CTAB法，最后虽然提取的量比较少，但是能用玻璃棒搅丝，之后用70%的乙醇洗盐，再之后风干（风干彻底），再之后用0.1xSSC溶解，却溶解不了，SSC是最新配制的，而且第一次提取的时候出现不溶解的情况，又重新配制了ssc···第二次还是不溶解。求大神指导。
或者哪位大神之前大提过链霉菌的DNA，求方法啊，我已经提了一个多月了，真心已经黔驴技穷了···

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科研路艰辛···

1楼 2013-12-23 16:43:49

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dgm1208

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

9楼: Originally posted by taoway at 2013-12-24 09:46:09
另外，我们长期提取链霉菌总DNA都是用溶菌酶方法提取的，你也可以试一下用此法小量提取下gDNA。
1. 取一干净Ep管，添加30 ul菌丝体至500 ul SET buffer，加10 ul Lysozyme solution (50 mg/ml)，混匀后37℃ 水浴3 ...

贵实验室大提吗？能够告知一下大提的实验步骤？不胜感激···

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科研路艰辛···

12楼2013-12-24 11:59:18

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开云者

铜虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+4, good！ 2013-12-23 21:38:05
dgm1208: 金币+30, ★★★很有帮助, 谢谢你哈，之前由于操作失误把之前的100金币都给了bikexmx，又追加的，金币不多，谢谢你 2013-12-26 18:19:51

方法一：如果这种菌能长成菌落，你就用宝生物的这个试剂盒来提一下（Lysis Buffer for Microorganism to Direct PCR），这个很便宜。
方法二：如果这个试剂盒不可以的话，你就用德国QIAGEN的试剂盒，这个大约1500，有点贵。
这些应该没有问题，你试试吧。
希望能帮到你

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挥霍不起青春

2楼2013-12-23 21:13:54

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taoway

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

总DNA??能过分挥干，乙醇脱?????甩下液体，用移液器???掉液体，敞???放置几分钟至闻??到乙醇味???就???以加水或buffer溶解。然???置于55度水浴个10分钟就???以了。??好??

[ ????С??????? ]

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3楼2013-12-23 22:04:00

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taoway

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
dgm1208: 金币+70, ★★★★★最佳答案, 谢谢你哈，之前由于操作失误把之前的100金币都给了bikexmx，又追加的，金币不多，谢谢你 2013-12-26 18:19:04

不好意思，刚才在路上用手机回复的，发现全是乱码。
我感觉你的问题出在DNA风干，我们实验室提取链霉菌总DNA后，用75%乙醇脱盐两次，然后稍稍spin一下用移液枪吸掉液体，敞口在超净台或工作台面放置几分钟至闻不到乙醇味道，随后加水或TE溶解DNA。混匀一下在55度水浴锅内放置5-10分钟促溶一下就可以了。注意一定不要将总DNA完全风干！祝好运！

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4楼2013-12-23 22:36:06

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