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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 链霉菌基因组DNA的大提
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dgm1208

银虫 (小有名气)

[求助] 链霉菌基因组DNA的大提

我有几株链霉菌想要提取基因组DNA后做杂交，大提DNA的方法是改良的CTAB法，最后虽然提取的量比较少，但是能用玻璃棒搅丝，之后用70%的乙醇洗盐，再之后风干（风干彻底），再之后用0.1xSSC溶解，却溶解不了，SSC是最新配制的，而且第一次提取的时候出现不溶解的情况，又重新配制了ssc···第二次还是不溶解。求大神指导。
或者哪位大神之前大提过链霉菌的DNA，求方法啊，我已经提了一个多月了，真心已经黔驴技穷了···
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科研路艰辛···
1楼 2013-12-23 16:43:49
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dgm1208

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by bikexmx at 2013-12-24 09:17:12
跑电泳没有条带吗？个人认为可能是样品里还存有蛋白质等杂质，可以再用氯仿-异戊醇抽提一下，楼主用的是什么方法提的，我们实验室一般用CTAB法，可以让溶菌酶和蛋白酶多反应一会，去除多余杂质，希望对你有帮助

感谢你的回复，能告知一下贵实验室的ctab的具体实验步骤吗？不胜感激···
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科研路艰辛···
11楼2013-12-24 11:55:37
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开云者

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+4, good！ 2013-12-23 21:38:05
dgm1208: 金币+30, ★★★很有帮助, 谢谢你哈，之前由于操作失误把之前的100金币都给了bikexmx，又追加的，金币不多，谢谢你 2013-12-26 18:19:51
方法一：如果这种菌能长成菌落 ，你就用宝生物的这个试剂盒来提一下（Lysis Buffer for Microorganism to Direct PCR），这个很便宜。
方法二：如果这个试剂盒不可以的话，你就用德国QIAGEN的试剂盒，这个大约1500，有点贵。
这些应该没有问题，你试试吧。
希望能帮到你
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挥霍不起青春
2楼2013-12-23 21:13:54
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taoway

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
总DNA??能过分挥干，乙醇脱?????甩下液体，用移液器???掉液体，敞???放置几分钟至闻??到乙醇味???就???以加水或buffer溶解。然???置于55度水浴个10分钟就???以了。??好??

[ ????С??????? ]
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3楼2013-12-23 22:04:00
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taoway

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
dgm1208: 金币+70, ★★★★★最佳答案, 谢谢你哈，之前由于操作失误把之前的100金币都给了bikexmx，又追加的，金币不多，谢谢你 2013-12-26 18:19:04
不好意思，刚才在路上用手机回复的，发现全是乱码。
我感觉你的问题出在DNA风干，我们实验室提取链霉菌总DNA后，用75%乙醇脱盐两次，然后稍稍spin一下用移液枪吸掉液体，敞口在超净台或工作台面放置几分钟至闻不到乙醇味道，随后加水或TE溶解DNA。混匀一下在55度水浴锅内放置5-10分钟促溶一下就可以了。注意一定不要将总DNA完全风干！祝好运！
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4楼2013-12-23 22:36:06
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