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koalading

木虫 (小有名气)

[求助] 悬浮细胞MTT法求助 已有7人参与

我这个新手最近一直在做脾细胞MTT实验,发现实验重现性很不好,就找了一下原因
1、可能是接种密度的问题
2、后来保证了同时做两块板的细胞相同,可结果还是不好,又找原因可能是加完MTT后有些结晶就吸出来,可是这个度把握不好,不吸干净就会残留培养基影响吸光度。因为条件有限,没有平板离心机,除了吸出来还能怎么办呢?用注射器吸吗?
3、网上查了一下,有人说悬浮细胞可以使用三联溶解液,这样就不用吸出来了,可是我用的96孔板,每个孔已经有100微升悬液和100微升药物,孔的容积已经不够再加100溶解液了,这时候怎么办呢?(前提是药物体积如果加的太少,误差也很大,而且不均匀,所以我没有选择只加10微升,而是配成一定浓度后加100或50微升)
求各位大神帮忙解决一下我的困惑,多谢了
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koalading

木虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by wangkaibo123 at 2013-12-25 23:13:33
细胞密度不均匀  这估计是最大的影响吧

悬浮细胞的话,应该还好吧,我加的挺快的,时不时也重新吹匀,感觉吸出来影响比较大
15楼2013-12-28 13:22:41
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caiyifan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
话说MTT不是要加DMSO溶解结晶后再测么???
I can and I will
3楼2013-12-24 10:45:41
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koalading

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by caiyifan at 2013-12-24 10:45:41
话说MTT不是要加DMSO溶解结晶后再测么???

是呀,不是先把上清液吸出来再加DMSO嘛,但是总能多少吸出部分结晶,肉眼可能看不到
4楼2013-12-24 12:43:10
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caiyifan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

哦,这样啊,那你可以不做MTT,做MTS,就没那么麻烦了,不用加DMSO,也不用吸上清了。
I can and I will
5楼2013-12-24 13:33:24
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