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smd1168毕赤酵母转化问题
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划板挑单克隆菌落表面光滑，之前转化未线性化的pPIC3.5k后长出来的单克隆也是表面光滑的，后来发现质粒要线性化，结果转入线性化质粒后菌落菌落形态就变了，表面有菌丝状东西，有点像霉菌，但是是有酒香味的，难道转化进质粒后酵母形态发生变化了么？大家有没遇到过，重复2次都这个结果，万分焦急！！！ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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luwei13566
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20楼2013-12-26 14:45:46
luwei13566
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【答案】应助回帖
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额，如果有菌丝了那肯定是染菌了啊，酵母的颜色改变没？赶紧去做一个镜检。丝状真菌和酵母菌肯定不一样的~， 如果你做几次都是这个样子的话,可能的原因有： 1.你的出发菌株可能已经染菌了。 2.你转化过程中染的杂菌。如果是电转化最有可能出问题的就是电转化杯，如果实在处理不好就换个试试 3.你的抗性筛选可能有问题。 其实你可以做一个菌落PCR验证一下。如果PCR验证了就直接诱导一次。管他什么形状，关键还是要出蛋白，出活性，如果不出蛋白，没有活性再考虑菌落形态的事情，因为要论证是你的线性化质粒导致菌落形态的改变是一件非常困难的事情。 |
2楼2013-12-23 00:48:42
3楼2013-12-23 08:14:08
4楼2013-12-23 12:10:05
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