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edmundcui

新虫 (初入文坛)

[求助] RP-HPLC分离后的色谱图,后续工作怎么开展?附图 已有1人参与

附件是经过DEAE柱过后,收集活性峰再过RP-HPLC的色谱图,SDS-PAGE胶没有条带,现在不知道后续怎么鉴定这个物质?
问题一:这两个峰都有活性,但是加完buffer煮样后变黄,所以现在不知道没有条带的原因是非蛋白物质,还是说因为变黄?
DEAE流动相是tris-HCL,HPLC流动相是甲醇,水,请大家分析下什么原因作用的?
问题二:目前的分离纯化如图:还需不需要继续跑分析HPLC看看?
问题三:如果是非蛋白类物质,采取什么手段鉴定其结构?LC-MS?一般都送去哪个公司?
RP-HPLC分离后的色谱图,后续工作怎么开展?附图
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wzh109

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
费姚永芬: 金币+3, 谢谢参与,补充交流,欢迎常来分析版 2013-12-21 16:08:05
如果分子量小于5000Da,可以做一下LC-MS,确定该物质的分子量,然后检索数据库,看一下可能是什么物质。下一步能到纯品后可以做红外和核磁确定其结构。LC-MS很多高校的测试中心都有,不知道你是哪个学校的?
2楼2013-12-20 20:46:29
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edmundcui

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wzh109 at 2013-12-20 20:46:29
如果分子量小于5000Da,可以做一下LC-MS,确定该物质的分子量,然后检索数据库,看一下可能是什么物质。下一步能到纯品后可以做红外和核磁确定其结构。LC-MS很多高校的测试中心都有,不知道你是哪个学校的?

谢谢!分子量不知道多大,我是海洋三所的,这边也有液质联用,不过貌似没有数据库,还有那个buffer样品变黄没有条带,你怎么看?
3楼2013-12-20 20:58:42
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wzh109

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by edmundcui at 2013-12-20 20:58:42
谢谢!分子量不知道多大,我是海洋三所的,这边也有液质联用,不过貌似没有数据库,还有那个buffer样品变黄没有条带,你怎么看?...

buffer样品变黄这个我也不知道是什么原因。没有条带可能是你的活性物质分子量较小,跑出去了。知道分子量之后可以去Dictionary of Natural Products去检索。
4楼2013-12-21 09:29:08
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edmundcui

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wzh109 at 2013-12-21 09:29:08
buffer样品变黄这个我也不知道是什么原因。没有条带可能是你的活性物质分子量较小,跑出去了。知道分子量之后可以去Dictionary of Natural Products去检索。...

嗯,好的,多谢
5楼2013-12-21 23:37:51
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