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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » RP-HPLC分离后的色谱图，后续工作怎么开展？附图
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edmundcui

新虫 (初入文坛)

[求助] RP-HPLC分离后的色谱图，后续工作怎么开展？附图 已有1人参与

附件是经过DEAE柱过后，收集活性峰再过RP-HPLC的色谱图，SDS-PAGE胶没有条带，现在不知道后续怎么鉴定这个物质？
问题一：这两个峰都有活性，但是加完buffer煮样后变黄，所以现在不知道没有条带的原因是非蛋白物质，还是说因为变黄？
DEAE流动相是tris-HCL,HPLC流动相是甲醇，水，请大家分析下什么原因作用的？
问题二：目前的分离纯化如图：还需不需要继续跑分析HPLC看看？
问题三：如果是非蛋白类物质，采取什么手段鉴定其结构？LC-MS？一般都送去哪个公司？
RP-HPLC分离后的色谱图，后续工作怎么开展？附图
图片1.jpg
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1楼 2013-12-20 19:31:37
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wzh109

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
费姚永芬: 金币+3, 谢谢参与，补充交流，欢迎常来分析版 2013-12-21 16:08:05
如果分子量小于5000Da，可以做一下LC-MS，确定该物质的分子量，然后检索数据库，看一下可能是什么物质。下一步能到纯品后可以做红外和核磁确定其结构。LC-MS很多高校的测试中心都有，不知道你是哪个学校的？
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2楼2013-12-20 20:46:29
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edmundcui

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wzh109 at 2013-12-20 20:46:29
如果分子量小于5000Da，可以做一下LC-MS，确定该物质的分子量，然后检索数据库，看一下可能是什么物质。下一步能到纯品后可以做红外和核磁确定其结构。LC-MS很多高校的测试中心都有，不知道你是哪个学校的？

谢谢！分子量不知道多大，我是海洋三所的，这边也有液质联用，不过貌似没有数据库，还有那个buffer样品变黄没有条带，你怎么看？
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3楼2013-12-20 20:58:42
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wzh109

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by edmundcui at 2013-12-20 20:58:42
谢谢！分子量不知道多大，我是海洋三所的，这边也有液质联用，不过貌似没有数据库，还有那个buffer样品变黄没有条带，你怎么看？...

buffer样品变黄这个我也不知道是什么原因。没有条带可能是你的活性物质分子量较小，跑出去了。知道分子量之后可以去Dictionary of Natural Products去检索。
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4楼2013-12-21 09:29:08
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edmundcui

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wzh109 at 2013-12-21 09:29:08
buffer样品变黄这个我也不知道是什么原因。没有条带可能是你的活性物质分子量较小，跑出去了。知道分子量之后可以去Dictionary of Natural Products去检索。...

嗯，好的，多谢
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5楼2013-12-21 23:37:51
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