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bb123456789

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
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帖子: 317
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虫号: 1101928

[交流] western boltting技术求救

目前，本人正在做一个目标基因在各个发育时期和某一时期各个组织中的表达情况分析

在DNA水平，做TR-PCR验证在各个组织以及不同的发育时期均表达，但是做western blotting分析时，总没有目标带出来，用同样的抗体对纯化蛋白进行western blotting分析能出来目标带，不知道大家有没有遇到这样的问题？是怎么解决的呢？

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1楼 2013-12-19 23:05:12

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

loveerobin

木虫 (职业作家)

应助: 27 (小学生)
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在线: 188小时
虫号: 1371932

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
bb123456789: 金币+2, 已经重提过了，效果还是不理想目前有一些进展了，还在优化条件 2013-12-27 09:43:15

引用回帖:

8楼: Originally posted by bb123456789 at 2013-12-20 09:50:13
目前总蛋白的上样量是100-150ug，一抗稀释按1:7500稀释的，二抗也是按这个比例稀释的我们的PVDF膜孔径是0.45um，300mA湿转了一个半小时。会不会因为表达量低，转膜的时候转过了呢？...

那就只能是提取蛋白的问题
最好是重提
最坏的可能就是表达量低