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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western boltting技术求救
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bb123456789

金虫 (正式写手)

[交流] western boltting技术求救

目前，本人正在做一个目标基因在各个发育时期和某一时期各个组织中的表达情况分析

在DNA水平，做TR-PCR验证在各个组织以及不同的发育时期均表达，但是做western blotting分析时，总没有目标带出来，用同样的抗体对纯化蛋白进行western blotting分析能出来目标带，不知道大家有没有遇到这样的问题？是怎么解决的呢？
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1楼 2013-12-19 23:05:12
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bb123456789

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by loveerobin at 2013-12-20 09:33:22
目的蛋白的表达量低或者提取蛋白的纯度不高
一抗多的话，可以减少一抗的稀释倍数

目前总蛋白的上样量是100-150ug，一抗稀释按1:7500稀释的，二抗也是按这个比例稀释的  我们的PVDF膜孔径是0.45um，300mA湿转了一个半小时。会不会因为表达量低，转膜的时候转过了呢？
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8楼2013-12-20 09:50:13
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144528

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我不懂，可是我支持！我不懂，可是我支持！我不懂，可是我支持！我不懂，可是我支持！
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2楼2013-12-19 23:24:30
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jinwei331

至尊木虫 (文坛精英)
…………………………
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3楼2013-12-19 23:36:27
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
bb123456789: 金币+1 2013-12-20 09:44:45
目标蛋白的表达量低，可以增加上样量并减小一抗稀释倍数。
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4楼2013-12-20 01:49:55
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