| 查看: 2330 | 回复: 10 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
fengmx2010木虫 (著名写手)
|
[求助]
利用gateway载体做RNAi和overexpression出现的问题，懂质粒构造的进！！！ 已有3人参与
|
|
|
大家好，我现在想通过gateway技术构建一种基因的RNAi和Overexpression表达载体。Destination plasmid是从国外购买的，这两种载体的图谱如下。 我已经将目的基因通过带有attB1和attB2位点的引物克隆得到了。BP反应和LR反应已经做完了，依据致死基因和T-DNA外面链霉素抗性以及酶切验证，三个把关，我感觉目的基因已经导入到正确位置了。 现在的问题是，我将纯化好的质粒想导入发根农杆菌中，选择了A4（带有利福平抗性）和AT15834野生型（无任何抗生素抗性）两种菌株。可是怎么也筛不到阳性克隆，要么是污染，要么是什么都不长！我用的是链霉素（100ug/ml）和利福平（50ug/ml）平板，不知道是不是链霉素抗性基因不能在农杆菌中表达啊？卡那抗性能在农杆菌中表达吗？内含子之间的CmR又是在哪里表达的呢？我查了文献，但是还是一头雾水。关键是，有没有一种方法，可以从基因序列直接推理出它在某种菌内的表达情况？？  overexpression用  RNAi用，内含子之间有一cat基因，LB RB之间有一kana抗性基因。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有280人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
3楼2013-12-24 20:49:58
Huobol
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 14473.1
- 散金: 70
- 红花: 7
- 帖子: 1274
- 在线: 162.9小时
- 虫号: 1214385
- 注册: 2011-02-26
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
2楼2013-12-19 22:48:33
fengmx2010
木虫 (著名写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 4659.4
- 红花: 2
- 帖子: 1353
- 在线: 234.1小时
- 虫号: 1227370
- 注册: 2011-03-09
- 性别: MM
- 专业: 植物化学保护
4楼2013-12-30 21:35:20
5楼2013-12-30 22:01:44
