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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 打断lacZ基因表达的最小插入片段是多少？
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 打断lacZ基因表达的最小插入片段是多少？ 已有1人参与

一般载体中都会带有lacZ基因，lacZ基因中带有MCS，插入片段插入到MCS中打断lacZ的表达，用于蓝白版筛选。
那么打断lacZ基因表达的最小插入片段是多少？
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借你一生好不好
1楼 2013-12-19 11:12:49
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gyesang

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-19 12:00:22
没有打断LacZ基因表达最小插入片段的说法，这个要取决于你插进去的片段是否和lacZ翻译对读码框，如果不对读码框，理论上一个碱基就可以破坏掉LacZ基因表达
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-12-19 11:21:33
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-19 11:21:33
没有打断LacZ基因表达最小插入片段的说法，这个要取决于你插进去的片段是否和lacZ翻译对读码框，如果不对读码框，理论上一个碱基就可以破坏掉LacZ基因表达

谢谢您的回复。
那怎么样算是对读码框呢？
平时做载体的时候，插入一个1000bp的片段，不管怎么样都会打断lacZ的表达的不是？
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借你一生好不好
3楼2013-12-19 11:46:23
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
不叶珏: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 感谢您的详细回复 2013-12-19 17:37:03
引用回帖:
3楼: Originally posted by 不叶珏 at 2013-12-19 11:46:23
谢谢您的回复。
那怎么样算是对读码框呢？
平时做载体的时候，插入一个1000bp的片段，不管怎么样都会打断lacZ的表达的不是？...

插入一个1000bp的片段，不打断lacZ的表达在实践中是一个小概率事件，但如果想弄清楚到底存不存在插入了一个1000bp的片段，而不会打断lacZ的表达的情况呢？这种情况是有的，一个极端的情况，就是LacZ和这1000bp一起表达成一个融合蛋白，中间没有任何中断，你可以结合LacZ编码序列在纸上进行一个推演
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-12-19 14:22:59
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lxj341401
1bp
5楼2013-12-19 16:47:00
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WQS1991

银虫 (正式写手)
看到这个问题+回复，感觉弄明白了不少事情。感谢啦
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6楼2014-08-05 15:56:26
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