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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 96孔板的贴壁细胞收集
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daisykang

新虫 (初入文坛)

[求助] 96孔板的贴壁细胞收集 已有2人参与

要收集96孔板中的贴壁细胞进行western blot 怎样收集比较好呢？培养瓶中传代的时候，用0.25%的胰酶消化很快就可以消化下来，如果检测蛋白，胰酶消化会不会对检测产生影响呢？多谢！
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1楼 2013-12-17 15:32:39
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daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为什么会将细胞种到96孔板中，然后收集做WESTERN呢，种到6孔板中，然后直接加裂解液就可以了，不用胰酶消化的
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2楼2013-12-17 16:06:01
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daisykang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by daibingling at 2013-12-17 16:06:01
为什么会将细胞种到96孔板中，然后收集做WESTERN呢，种到6孔板中，然后直接加裂解液就可以了，不用胰酶消化的

因为要做加药实验，96孔板酶标仪检测出结果后细胞才能使用。所以要收集96孔板中的细胞。
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3楼2013-12-19 09:19:42
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以直接用EDTA收集，不加胰酶，这样蛋白监测影响不大。
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4楼2013-12-19 11:32:03
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皮皮220

新虫 (初入文坛)
每孔加一滴胰酶，放在37度培养箱中2-3分钟(时间可以适当延长)，轻拍板底细胞脱落了，然后每孔加一滴培养基终止消化就行了，再做后续试验呗
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5楼2013-12-19 15:39:03
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daisykang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wolfman840 at 2013-12-19 11:32:03
你可以直接用EDTA收集，不加胰酶，这样蛋白监测影响不大。

谢谢！那么胰酶消化是有影响的咯？
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6楼2013-12-20 12:23:45
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