应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：关于rTaq和LA Taq酶的
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1451  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

zhucj82

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 求助：关于rTaq和LA Taq酶的

我要扩增3400bp的目的基因用于克隆，用的rTaq一次都没扩增出来过，想换LAtaq，可不知LA Taq使用时Mg、dNTP、酶、buffer的用量，还有程序是否与rTaq一样：
94度，5min
94度，1min
65度，1min
72度，4min
30cycles
72度，15min
请高手们帮帮忙，感激不尽！实在是做的太郁闷了！
奖励金币10个！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2007-12-30 12:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Airare

金虫 (正式写手)

虫游天下
★ ★
谷峰(金币+2,VIP+0):谢谢！！！！
用普通Taq既然一次都扩增不出来，程序本来就不好了吧。酶的保真性还是很重要的，特别是你要的基因又比较大，所以就应该用高保真酶。以前做扩不出来，换了酶，原程序也可做的出来，不过你的原程序嘛～
LA Taq 还是不错的选择，条件还得摸一下。顺便说一下，做的好的话，循环数20－25就行了，以免突变，得不偿失～
赞一下(10人) 回复此楼
——穿越死亡之门，到我这里来，虽则梦想褪色，岁月集成的果实腐烂掉，但我是永恒的真理，你将再会见我，在你从此岸渡向彼岸的生命航程中...
2楼2007-12-30 12:41:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dearmarie

铁虫 (初入文坛)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):欢迎交流
3400bp确实应该用LATaq，rTaq扩两千以下的，多了就不行了。关于反应体系，参考说明书的推荐体系，有两种buffer，买的时候问清楚，普通的buffer以及GC buffer，根据你的GC含量而定。你的反应条件中退火温度似乎较高，是因为引物的Tm值就设计的很高吗，可以降低些，或做个梯度试试，延伸时间按15~30s/kb即可。
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2007-12-30 20:57:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

freshair33

谢谢帮助
我两条引物的Tm值分别是63和65度，我实际做用过55，57，59度，都没扩出来。
楼上的是说LA Taq的延伸速度是15~30s/kb吗？跟rTaq相差挺远的啊
赞一下 回复此楼
4楼2007-12-31 12:28:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dearmarie

铁虫 (初入文坛)
★
johnsooh(金币+1,VIP+0):thx
我说的是用LA Taq时延伸时间的设定依据扩增子长度来计算。
你这样的引物Tm值，当然应该往低的温度试，65显然不行，还有，你是用rTaq试的，那不成功很正常。改用LA再试试，降低退火温度，三千多不算难扩的。
赞一下(10人) 回复此楼
5楼2007-12-31 20:36:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhucj82 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 296求调剂 +4 汪！？！ 2026-03-31 7/350 2026-04-01 22:04 by 客尔美德
[考研] 275求调剂 +12 waltzh 2026-04-01 12/600 2026-04-01 21:44 by chyhaha
[考研] 316求调剂 +9 舟自梗 2026-04-01 10/500 2026-04-01 18:13 by 无际的草原
[考研] 336求调剂 +3 kiyy 2026-04-01 3/150 2026-04-01 12:46 by wxiongid
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:35 by wangjy2002
[考研] 085410人工智能 初试316分 求调剂 +3 残星拂曙 2026-03-31 3/150 2026-04-01 11:09 by 小熊raider
[考研] 0855机械初试280求调剂 +3 kazenotori 2026-03-31 3/150 2026-04-01 10:08 by JourneyLucky
[考研] 【调剂】一志愿厦大生物与医药调剂 +3 Echo虾米 2026-03-31 3/150 2026-04-01 08:40 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +9 akdhjs 2026-03-31 10/500 2026-03-31 17:14 by zhyzzh
[考研] 材料工程专硕求调剂 +10 hyl3153942 2026-03-29 10/500 2026-03-31 16:31 by hypershenger
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
[考研] 22408 359分调剂 +4 Qshers 2026-03-27 8/400 2026-03-31 08:53 by Qshers
[考研] 本科211总分289，08工学真心求调剂 +3 utopiaE 2026-03-30 3/150 2026-03-30 23:42 by ms629
[考研] 材料化工340求调剂 +3 jhx777 2026-03-30 3/150 2026-03-30 17:54 by JourneyLucky
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +12 芋泥小铃铛 2026-03-28 12/600 2026-03-30 17:06 by wangjy2002
[考研] 348求调剂 +6 小懒虫不懒了 2026-03-28 6/300 2026-03-30 10:29 by Evan_Liu
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +4 邱gl 2026-03-26 7/350 2026-03-30 08:39 by 探123
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 08开头275求调剂 +4 拉谁不重要 2026-03-26 4/200 2026-03-27 14:12 by Delta2012
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭