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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+3, MolEPI+1, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-12-15 18:14:31
1. 不做融合蛋白时的确不用考虑太多，只需要检查一下启动子下游到目的基因起始之间是否有ATG或者GTG，否则可能出现不同的翻译起始。融合基因表达当然要考虑是否移码，因为两个ORF是要连起来表达.
2. 保护碱基只是在切PCR产物时起作用，连接到载体时已经被酶切掉了。
3. 你需要稍微复习一下分子生物学基础。DNA中的模板链是与mRNA互补的，引物序列是与mRNA方向相同，也就是上游引物是5'-保护碱基-酶切位点-ATG-.......。如果反过来设计引物，没有ATG不会起始，而且也不是正确的产物。
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2楼2013-12-15 13:06:30
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