24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 138  |  回复: 2
当前主题已经存档。
【悬赏金币】回答本帖问题,作者冰眉儿将赠送您 10 个金币

冰眉儿

木虫 (著名写手)

[求助] [求助]DNA、RNA等含量检测

请教:霉菌DNA、RNA、脂肪酸、氨基酸含量测定的方法。希望能够提供具体的试验步骤或参考文献。谢谢!

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhenyanweixiao

金虫 (正式写手)

一、光密度测定法
  [原理]

  DNA和RNA在260nm处有一很高的吸收峰,利用这个原理我们测其OD260,再推算出其浓度。

    [仪器]

    分光光度计(紫外可见光两用)。

    [试剂]

    水,DNA或RNA溶液。

    [操作]

    (1)取5ulDNA样品或4ulRNA样品加水到lml。

    (2)用lml水做空白。

    (3)把样品杯放在分光光度计比色槽上。

    (4)每ul中DNA或RNA浓度(ug)将是OD值的10倍,例如稀释后样品在260nm处OD值为0.2,则原DNA或RNA样品浓度为2ug/ul。

    (5)如果想要检测样品的纯度,那么还要再测一次280nm处OD值,计算二者的比率,若比率接近2,则说明样品中核酸比较纯。若比率小于1.6,则说明蛋白或其它吸收此波长的杂质在其中,建议再用酚/氯仿抽提继以乙醇沉淀以除去杂质。

    (6)如果想检测样品中是否残存酚等有机杂质,那么还要测定一次230nm处OD值。

    二、琼脂糖电泳测量法

    [原理]

    质粒DNA及微量DNA片段的浓度可与已知浓度的DNA同时进行电泳,根据结合的溴化乙锭荧光强度,估计其含量。

    [仪器]

    紫外透射反射分析仪(上海康华生化仪器制造厂);电泳槽;电泳梳;电泳仪。

    [试剂]

    6×上样缓冲液:0.25%溴酚蓝;40%(W/V)糖。

    10×TBE电泳缓冲液:0.89mol/LTris-硼酸;0.02mol/LEDTANa2pH8.3。

    0.8%琼脂糖:0.8%琼脂糖;100mi 1×TBE

    5mg/mlEB:0.5gEB;100ml三蒸水

    [操作]

    (1)用1×TBE电泳缓冲液0.8%琼脂糖凝胶,加溴化乙锭其终浓度为0.5ug/m1。

    (2)加热使琼脂糖熔化均匀,取出室温冷却至50-60℃。

    (3)取一块5×7cm玻璃板,置水平台上,放一微型点样梳,点样梳底部离玻璃平板的距离为0.5-1. 0mm。

    (4)将凝胶小心倒在玻璃板上,待冷却后取出点样梳,保持点样孔的完好。

    (5)取DNA样品及),DNA标准浓度各lul加入1×TBE4ul,加入6×上样缓冲液lul,混

  匀。

    (6)在0.8%琼脂糖凝胶点样孔小心点样,记录样品点样次数与点样量。

    (7)打开电源开关,电压不超过5V/cm,一般40V,30-40分钟。   

    (8)取出泳动后的凝胶板,翻转玻璃盖在紫外分析仪观察DNA区带。

    (9)DNA含量的估计:比较待测DNA的条带与已知DNA的各条带的荧光密度,估计待测DNA在凝胶中的含量,再估计出其浓度。
2楼2008-01-08 08:09:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhenyanweixiao

金虫 (正式写手)

3楼2008-01-08 08:32:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 冰眉儿 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 急需调剂 +5 绝不放弃22 2026-04-15 5/250 2026-04-15 23:11 by Tide man
[考研] 恳请有学校收留 +5 柯淮然 2026-04-12 5/250 2026-04-15 21:49 by noqvsozv
[考研] 322求调剂 +7 123安康 2026-04-12 14/700 2026-04-15 21:48 by noqvsozv
[考研] 生物学调剂 +9 纸扇zhishan 2026-04-13 9/450 2026-04-15 18:28 by AN流800
[考研] 求调剂 +16 雪逢冬 2026-04-10 16/800 2026-04-14 14:27 by 逆水乘风
[考研] 一志愿哈工大 085600 277 12材科基求调剂 5+5 chenny174 2026-04-10 37/1850 2026-04-14 07:39 by Abskk
[考研] 求调剂,985材料与化工348分 +9 涵竹刘 2026-04-11 14/700 2026-04-13 22:26 by 涵竹刘
[考研] 297工科,求调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-12 13/650 2026-04-13 14:12 by dingyanbo1
[考研] 346分,工科0854求调剂,专硕 +6 moser233 2026-04-12 7/350 2026-04-12 22:11 by fqwang
[考研] 电气工程专硕320求调剂 +5 小麻子111 2026-04-10 5/250 2026-04-12 10:47 by zhouyuwinner
[考研] 291求调剂 +8 关忆北. 2026-04-11 8/400 2026-04-12 09:32 by 逆水乘风
[考研] 求调剂,一志愿大连理工大学354分 +5 雨声余生 2026-04-11 6/300 2026-04-11 16:12 by 雨声余生
[考研] 0854调剂 +5 音像店听花鼓戏 2026-04-10 5/250 2026-04-11 10:49 by qingpingzhu
[考研] 342电子信息专硕求调剂 +9 你让我怎么荔枝 2026-04-10 10/500 2026-04-11 08:33 by zhq0425
[考研] 一志愿北理工298英一数二已上岸,感谢各位老师 +14 Reframe 2026-04-10 16/800 2026-04-10 23:07 by caotw2020
[考研] 调剂 +12 卷卷卷心菜_ 2026-04-09 13/650 2026-04-10 22:36 by Ftglcn90
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 284求调剂 +9 让我上岸吧阿西 2026-04-09 11/550 2026-04-10 19:18 by 靖jing
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
信息提示
请填处理意见