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lm334723460

银虫 (小有名气)

[交流] 定量PCR 已有7人参与

我做PCR时总感觉枪头里的溶液没打干净，特别是1ul 以下的。做了几次定量平行都不好，数据也没法用。各位大虾们帮帮忙。
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1楼 2013-12-11 11:20:54
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yucuiyuan00

金虫 (正式写手)
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gyesang: 金币+2, 很好的建议，鼓励交流哈！ 2013-12-11 18:34:30
我经常吸1微升一下的液体，都能打干净的。首先移液器要选好，最好用进口的最大量程是1ul的枪；其次装枪头要注意，不要用枪用力去戳枪头，枪对准枪头轻轻用力转半圈就OK啦
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保持平常心❤
5楼2013-12-11 18:05:59
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love_st

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-11 18:33:49
多配点，尽量减少微量加样
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2楼2013-12-11 13:15:37
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匿名

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-11 18:34:00
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3楼2013-12-11 15:10:39
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lm334723460

银虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by wg0541001 at 2013-12-11 15:10:39
相同的成分先配在一起，之后再分装，这样比较容易出一致的结果，另外加样最好大于1ul，否则就要用到特别的枪，个人经验。

有些PCR反应体系里要求的，比如taq酶，只要加0.5ul的
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4楼2013-12-11 17:26:14
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
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这取决于你用多大的枪去吸1ul的样品，如果用量程只有2ul或者2.5ul的枪去吸的话，应该不大会出现你的问题，如果用10ul或者20ul的枪去吸那就说不定了
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6楼2013-12-11 18:35:45
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lm334723460

银虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-11 18:35:45
这取决于你用多大的枪去吸1ul的样品，如果用量程只有2ul或者2.5ul的枪去吸的话，应该不大会出现你的问题，如果用10ul或者20ul的枪去吸那就说不定了

用2.5ul 枪吸的0.5ul
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7楼2013-12-11 21:05:32
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匿名

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8楼2013-12-12 12:34:00
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bio-li

金虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by lm334723460 at 2013-12-11 17:26:14
有些PCR反应体系里要求的，比如taq酶，只要加0.5ul的...

这个不对吧  反应体系可以一次混匀然后再分装，少量的如样本就没办法了，尽量采用小量程的枪应该问题不大
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你不能解决问题，你就会成为问题
9楼2013-12-12 13:32:25
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半生一梦

木虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-12 18:54:37
先做好混样然后再加嘛 不然1ul以下的确实比较苦逼
或者使用移液器吸液体的时候按到底 然后打出来别按到底 这样貌似小体积的液体吸的会准一点
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10楼2013-12-12 13:35:33
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