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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » folin-酚法和凯氏定氮法所测蛋白质的区别，folin-酚法远低于凯氏定氮法
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liyanan2012

铜虫 (初入文坛)

[求助] folin-酚法和凯氏定氮法所测蛋白质的区别，folin-酚法远低于凯氏定氮法 已有3人参与

同一种样品，我用folin-酚法所测的蛋白质含量远低于凯氏定氮所测的蛋白质含量，大概少10%，通过查文献知道，第一步是在碱性条件下，蛋白质与二价铜作用生成蛋白质-铜络合物；第二步是此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂（Folin 试剂）还原，产生深蓝色（磷钼蓝和磷钨蓝混合物），颜色深浅与蛋白质含量成正比。我的样品中蛋白质含量在folin-酚法所要求的蛋白质浓度范围内。我想请问大家，凯氏定氮法所得的是总蛋白，那么用folin-酚法所测的蛋白是什么类型的蛋白，比如，可溶性蛋白，游离蛋白，结合蛋白？糖蛋白中与糖结合的蛋白，是否能用folin-酚试剂测出呢？
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1楼 2013-12-11 11:12:14
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蓝风腾

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liyanan2012: 金币+1, ★有帮助, 谢谢您的回复，但是，我做出的结果是这个样子，老师给的建议是查一查folin-酚法测的是什么类型的蛋白 2013-12-13 14:25:44
凯氏定氮法测的并不是总蛋白，而是总氮，包括核酸、硝酸盐、铵盐等都被换算成了蛋白质，所测含量必然偏高，当年的三聚氰胺就是钻的这个空子。福临酚法测得也不一定是总蛋白，而且干扰物质多，操作麻烦，可以考虑考马斯亮蓝或者BCA法。其实如果尽量排除干扰，四种方法都可以，做实验不要纠结这个问题。

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2楼2013-12-12 08:06:51
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baiyan1988

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 蓝风腾 at 2013-12-12 08:06:51
凯氏定氮法测的并不是总蛋白，而是总氮，包括核酸、硝酸盐、铵盐等都被换算成了蛋白质，所测含量必然偏高，当年的三聚氰胺就是钻的这个空子。福临酚法测得也不一定是总蛋白，而且干扰物质多，操作麻烦，可以考虑考马 ...

福林酚法不仅能测蛋白质而且游离的单个氨基酸也能使其显色，比如苯丙氨酸、酪氨酸，这个我已经做过实验了。
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3楼2014-06-16 15:32:10
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蓝风腾

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by baiyan1988 at 2014-06-16 15:32:10
福林酚法不仅能测蛋白质而且游离的单个氨基酸也能使其显色，比如苯丙氨酸、酪氨酸，这个我已经做过实验了。...

不知道你回我帖的意思是什么？我否定了你的理论吗？

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4楼2014-06-16 16:55:28
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sheppard

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

福林酚法测蛋白主要是与蛋白中的酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸的侧链发生颜色反应。凯氏定氮是测定N的含量，推算蛋白含量。福林酚法受到诸多问题影响，如酚类、柠檬酸和巯基化合物影响，而且不同蛋白质因络氨酸、色氨酸含量的不同而使显色强度稍有不同，因此结果存在一点点偏差。对于凯氏定氮测定的N主要是每个氨基酸都带有的氨基上的N，所以相对来说，食品类样品用凯氏定氮测定的结果较为准确。
不过不管是哪个方法，自己做都比较麻烦，所以为了提高效率，一般我们都直接网上送样做了。
淘宝上搜店铺“老猫科研”，他们50一个样吧，速度挺快的，我们一般就直接送样做。
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5楼2021-07-02 10:11:21
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