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liyanan2012

铜虫 (初入文坛)

[求助] folin-酚法和凯氏定氮法所测蛋白质的区别,folin-酚法远低于凯氏定氮法 已有3人参与

同一种样品,我用folin-酚法所测的蛋白质含量远低于凯氏定氮所测的蛋白质含量,大概少10%,通过查文献知道,第一步是在碱性条件下,蛋白质与二价铜作用生成蛋白质-铜络合物;第二步是此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂(Folin 试剂)还原,产生深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物),颜色深浅与蛋白质含量成正比。我的样品中蛋白质含量在folin-酚法所要求的蛋白质浓度范围内。我想请问大家,凯氏定氮法所得的是总蛋白,那么用folin-酚法所测的蛋白是什么类型的蛋白,比如,可溶性蛋白,游离蛋白,结合蛋白?糖蛋白中与糖结合的蛋白,是否能用folin-酚试剂测出呢?
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蓝风腾

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
liyanan2012: 金币+1, ★有帮助, 谢谢您的回复,但是,我做出的结果是这个样子,老师给的建议是查一查folin-酚法测的是什么类型的蛋白 2013-12-13 14:25:44
凯氏定氮法测的并不是总蛋白,而是总氮,包括核酸、硝酸盐、铵盐等都被换算成了蛋白质,所测含量必然偏高,当年的三聚氰胺就是钻的这个空子。福临酚法测得也不一定是总蛋白,而且干扰物质多,操作麻烦,可以考虑考马斯亮蓝或者BCA法。其实如果尽量排除干扰,四种方法都可以,做实验不要纠结这个问题。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2013-12-12 08:06:51
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baiyan1988

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 蓝风腾 at 2013-12-12 08:06:51
凯氏定氮法测的并不是总蛋白,而是总氮,包括核酸、硝酸盐、铵盐等都被换算成了蛋白质,所测含量必然偏高,当年的三聚氰胺就是钻的这个空子。福临酚法测得也不一定是总蛋白,而且干扰物质多,操作麻烦,可以考虑考马 ...

福林酚法不仅能测蛋白质而且游离的单个氨基酸也能使其显色,比如苯丙氨酸、酪氨酸,这个我已经做过实验了。
3楼2014-06-16 15:32:10
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蓝风腾

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by baiyan1988 at 2014-06-16 15:32:10
福林酚法不仅能测蛋白质而且游离的单个氨基酸也能使其显色,比如苯丙氨酸、酪氨酸,这个我已经做过实验了。...

不知道你回我帖的意思是什么?我否定了你的理论吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-06-16 16:55:28
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sheppard

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

福林酚法测蛋白主要是与蛋白中的酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸的侧链发生颜色反应。凯氏定氮是测定N的含量,推算蛋白含量。福林酚法受到诸多问题影响,如酚类、柠檬酸和巯基化合物影响,而且不同蛋白质因络氨酸、色氨酸含量的不同而使显色强度稍有不同,因此结果存在一点点偏差。对于凯氏定氮测定的N主要是每个氨基酸都带有的氨基上的N,所以相对来说,食品类样品用凯氏定氮测定的结果较为准确。
不过不管是哪个方法,自己做都比较麻烦,所以为了提高效率,一般我们都直接网上送样做了。
淘宝上搜店铺“老猫科研”,他们50一个样吧,速度挺快的,我们一般就直接送样做。
5楼2021-07-02 10:11:21
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