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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 晶体 » 设计培养 » 蛋白容易沉
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fxj33102013

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白容易沉

最近做了几个金黄色葡萄球菌的蛋白，有2个是过完镍柱就沉，有一个是换低盐buffer时沉。上清中蛋白浓度很小，如果用上清过QFF或S200剩余的量明显不够筛晶体的。接下来不知道是重新截取片段还是尝试换不同的buffer，ph尝试。求高人指点！
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Iknowsomeoneintheworldiswaitingforme,althoughI'venoideaofwhoheis.ButIfeelhappyeverydayforthis.
1楼 2013-12-05 20:46:27
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

我们实验室有类似经历，提的时候可以尝试全程都加点甘油，10%左右试试看吧，祝你好运。
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4楼2013-12-10 22:17:15
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查看全部 6 个回答

recca1016

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fxj33102013: 金币+50, ★★★很有帮助, 谢谢了，我试一下！ 2014-01-11 10:35:47
1 如果蛋白是可溶性表达，用lysis buf超声后的上清过镍柱我还没有遇到过沉淀的情况，有一种可能就是超声过猛，而蛋白本身不是真的可溶性表达

2 这种情况应该比较常见，通常lysis buf 含0.5的NaCl， 之后纯化时也应保持稍高的盐浓度进行。比如0.2M NaCl。
担心不挂柱的话，可以将过镍柱的蛋白先稀释到不同盐浓度，看看在哪个盐浓度以上能稳定，再继续做离子交换。

希望对你有点帮助。
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流水不腐，户枢不蠹
2楼2013-12-06 09:19:18
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niushuaiji

金虫 (正式写手)

不放弃的小鸟

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是蛋白对盐离子浓度变化敏感
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

fxj33102013
Tobeornottobe,that'saproblem
3楼2013-12-06 09:46:34
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fxj33102013

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lihe131 at 2013-12-10 22:17:15
我们实验室有类似经历，提的时候可以尝试全程都加点甘油，10%左右试试看吧，祝你好运。

好的，谢谢！
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Iknowsomeoneintheworldiswaitingforme,althoughI'venoideaofwhoheis.ButIfeelhappyeverydayforthis.
5楼2014-01-11 10:37:56
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查看全部 6 个回答
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