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蛋白容易沉
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| 最近做了几个金黄色葡萄球菌的蛋白，有2个是过完镍柱就沉，有一个是换低盐buffer时沉。上清中蛋白浓度很小，如果用上清过QFF或S200剩余的量明显不够筛晶体的。接下来不知道是重新截取片段还是尝试换不同的buffer，ph尝试。求高人指点！ |
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niushuaiji
金虫 (正式写手)
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fxj331020133楼2013-12-06 09:46:34
recca1016
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【答案】应助回帖
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fxj33102013: 金币+50, ★★★很有帮助, 谢谢了，我试一下！ 2014-01-11 10:35:47
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fxj33102013: 金币+50, ★★★很有帮助, 谢谢了，我试一下！ 2014-01-11 10:35:47
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1 如果蛋白是可溶性表达，用lysis buf超声后的上清过镍柱我还没有遇到过沉淀的情况，有一种可能就是超声过猛，而蛋白本身不是真的可溶性表达 2 这种情况应该比较常见，通常lysis buf 含0.5的NaCl， 之后纯化时也应保持稍高的盐浓度进行。比如0.2M NaCl。 担心不挂柱的话，可以将过镍柱的蛋白先稀释到不同盐浓度，看看在哪个盐浓度以上能稳定，再继续做离子交换。 希望对你有点帮助。 |
2楼2013-12-06 09:19:18
lihe131
至尊木虫 (文坛精英)
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4楼2013-12-10 22:17:15
5楼2014-01-11 10:37:56