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fanwq258

木虫 (正式写手)


[交流] gateway克隆B序列末端家不叫A

如题,要做gateway克隆,不知道普通的加A TAQ酶能不能用,还有就是必须的是25bp吗?有的文章中在25bp基础上加了个GGGG是什么意思?

[ Last edited by fanwq258 on 2013-12-2 at 12:06 ]
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伤何处

木虫 (正式写手)


引用回帖:
8楼: Originally posted by fanwq258 at 2013-12-05 12:31:11
反应体系为:
组分                   使用量
PCR产物                   2.0 μl
Salt solution         0.5 μl
pENTR D-TOPO 载体         0.5 μl
总体积                   3.0 μl
  于22.5℃过夜连接反应。
那请问这个算什么反应呢? ...

你用TOPO载体那肯定是TOPO反应,酶的话已经在试剂里面,但没标出来 。体系跟我之前做的是一样的
12楼2013-12-05 16:34:05
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伤何处

木虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-06 14:39:59
加上4个G,好像是提高重组反应的效率。我一般短片端用的Ex Taq酶,长片段用的高保真的酶,都能成
2楼2013-12-02 16:47:32
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fanwq258

木虫 (正式写手)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 伤何处 at 2013-12-02 16:47:32
加上4个G,好像是提高重组反应的效率。我一般短片端用的Ex Taq酶,长片段用的高保真的酶,都能成

有人告诉我设计引物时在
上游引物:CACC+目的基因
下游:目的基因
怎么回事啊,都不需要B序列吗?
3楼2013-12-03 11:56:58
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伤何处

木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
fanwq258: 金币+5 2014-04-01 19:45:18
引用回帖:
3楼: Originally posted by fanwq258 at 2013-12-03 11:56:58
有人告诉我设计引物时在
上游引物:CACC+目的基因
下游:目的基因
怎么回事啊,都不需要B序列吗?...

这个是TOPO克隆的,需要TOPO酶。加attB是用来做BP反应的,需要BP重组酶   两种都是构建entry载体的方法
4楼2013-12-03 15:35:57
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