应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » gateway克隆B序列末端家不叫A
51/1返回列表
查看: 2360  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

fanwq258

木虫 (正式写手)

[交流] gateway克隆B序列末端家不叫A

如题，要做gateway克隆，不知道普通的加A TAQ酶能不能用，还有就是必须的是25bp吗？有的文章中在25bp基础上加了个GGGG是什么意思？

[ Last edited by fanwq258 on 2013-12-2 at 12:06 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-12-02 11:50:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 伤何处 at 2013-12-03 19:44:57
看你目的了，目的载体上如果是attR位点的话，那就要买TOPO或者BP中的一个，再加一个LR。如果载体上是attP位点，那就只要TOPO或者BP中的一个，不需要LR...

反应体系为:
组分                   使用量
PCR产物                   2.0 μl
Salt solution         0.5 μl
pENTR D-TOPO 载体         0.5 μl
总体积                   3.0 μl
　　于22.5℃过夜连接反应。
那请问这个算什么反应呢？有人跟我说是BP反应，但是没用酶啊，有TOPO载体
赞一下 回复此楼
8楼2013-12-05 12:31:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

伤何处

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-06 14:39:59
加上4个G，好像是提高重组反应的效率。我一般短片端用的Ex Taq酶，长片段用的高保真的酶，都能成
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-02 16:47:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 伤何处 at 2013-12-02 16:47:32
加上4个G，好像是提高重组反应的效率。我一般短片端用的Ex Taq酶，长片段用的高保真的酶，都能成

有人告诉我设计引物时在
上游引物：CACC+目的基因
下游：目的基因
怎么回事啊，都不需要B序列吗？
赞一下 回复此楼
3楼2013-12-03 11:56:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

伤何处

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
fanwq258: 金币+5 2014-04-01 19:45:18
引用回帖:
3楼: Originally posted by fanwq258 at 2013-12-03 11:56:58
有人告诉我设计引物时在
上游引物：CACC+目的基因
下游：目的基因
怎么回事啊，都不需要B序列吗？...

这个是TOPO克隆的，需要TOPO酶。加attB是用来做BP反应的，需要BP重组酶   两种都是构建entry载体的方法
赞一下 回复此楼
4楼2013-12-03 15:35:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +4 墨墨漠 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:02 by 绿色港湾
[考研] 考研化学308分求调剂 +5 你好明天你好 2026-03-23 6/300 2026-03-23 11:02 by 素颜倾城1988
[考研] 0854 考研调剂 招生了！AI 方向 +3 pk3725069 2026-03-19 13/650 2026-03-23 11:00 by 汪！？！
[考研] 085600材料与化工 +10 安全上岸！ 2026-03-16 10/500 2026-03-23 09:31 by Jy?
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 307求调剂 +11 冷笙123 2026-03-17 11/550 2026-03-22 20:16 by edmund7
[考研] 293求调剂 +12 zjl的号 2026-03-16 17/850 2026-03-22 16:51 by i_cooler
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-20 3/150 2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 求调剂 +3 白QF 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:12 by zhukairuo
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 307求调剂 +3 wyyyqx 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 材料工程（专）一志愿985 初试335求调剂 +3 hiloiy 2026-03-17 4/200 2026-03-21 03:04 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭