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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » gateway克隆B序列末端家不叫A
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fanwq258

木虫 (正式写手)

[交流] gateway克隆B序列末端家不叫A

如题，要做gateway克隆，不知道普通的加A TAQ酶能不能用，还有就是必须的是25bp吗？有的文章中在25bp基础上加了个GGGG是什么意思？

[ Last edited by fanwq258 on 2013-12-2 at 12:06 ]
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1楼 2013-12-02 11:50:45
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 伤何处 at 2013-12-03 19:44:57
看你目的了，目的载体上如果是attR位点的话，那就要买TOPO或者BP中的一个，再加一个LR。如果载体上是attP位点，那就只要TOPO或者BP中的一个，不需要LR...

反应体系为:
组分                   使用量
PCR产物                   2.0 μl
Salt solution         0.5 μl
pENTR D-TOPO 载体         0.5 μl
总体积                   3.0 μl
　　于22.5℃过夜连接反应。
那请问这个算什么反应呢？有人跟我说是BP反应，但是没用酶啊，有TOPO载体
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8楼2013-12-05 12:31:11
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伤何处

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-06 14:39:59
加上4个G，好像是提高重组反应的效率。我一般短片端用的Ex Taq酶，长片段用的高保真的酶，都能成
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2楼2013-12-02 16:47:32
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 伤何处 at 2013-12-02 16:47:32
加上4个G，好像是提高重组反应的效率。我一般短片端用的Ex Taq酶，长片段用的高保真的酶，都能成

有人告诉我设计引物时在
上游引物：CACC+目的基因
下游：目的基因
怎么回事啊，都不需要B序列吗？
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3楼2013-12-03 11:56:58
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伤何处

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
fanwq258: 金币+5 2014-04-01 19:45:18
引用回帖:
3楼: Originally posted by fanwq258 at 2013-12-03 11:56:58
有人告诉我设计引物时在
上游引物：CACC+目的基因
下游：目的基因
怎么回事啊，都不需要B序列吗？...

这个是TOPO克隆的，需要TOPO酶。加attB是用来做BP反应的，需要BP重组酶   两种都是构建entry载体的方法
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4楼2013-12-03 15:35:57
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