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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by real-time at 2013-11-27 08:37:46
你现在做标准曲线碰到的问题是你的样本浓度不够高
你的样品是什么,RAN DNA 或者 CDNA?
你的标准曲线是用什么做的?
如果后面要检测的样品是DNA,那可以做克隆,用线性化的质粒来做标准曲线和体系优化
如果后 ...

1 样本浓度的确不高,主要是样品提取的RNA产量太低,样品是木本植物提取的RNA,不好提取,标曲采用混合cDNA为模板做的,
2 我也知道可以做克隆,用质粒来做标曲,但是有点麻烦,本实验室条件较不方便。。。
    谢谢至尊木虫,问题都提在关键点上
思路决定出路。。。
11楼2013-12-05 08:48:10
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by yangjianchen at 2013-11-27 11:12:32
只要样品的Ct值落在标曲范围内都应该是可以接收到哦,但是梯度尽量多肯定是更好的。我们之前做都是设置7个梯度,最后去掉一两个差的。

这样严谨一些,确实比较好
思路决定出路。。。
12楼2013-12-05 08:48:27
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love_st

金虫 (著名写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by zzl2516 at 2013-11-26 08:37:57
你这扩增能曲线都没有到平台期肯定不行,建议提高模板和引物浓度,使扩增曲线打到平台期,让CT值提前一些,最好到10-20之间吧

兄弟,请教下,为什么没有平台期不行?提高模板和引物浓度他这个试验能达到你10-20么?
13楼2013-12-05 09:32:24
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-11-26 19:21:46
好的。那你就用吧。如果投点分子生物学的国外期刊。那就难了...

出差去了好几天,现在才上线,请问是不是即使文章上不用放标曲,也要提供标曲原图给编辑看呢?因为我看一些外文其实并不需要放标曲上去。。。
思路决定出路。。。
14楼2013-12-05 09:48:58
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沙门小rna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-12-05 09:48:58
出差去了好几天,现在才上线,请问是不是即使文章上不用放标曲,也要提供标曲原图给编辑看呢?因为我看一些外文其实并不需要放标曲上去。。。...

应该是的,不然可能得补

[ 发自小木虫客户端 ]
应助之星就是我~没错。你没有看错~
15楼2013-12-05 10:46:49
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real-time

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-12-05 08:48:10
1 样本浓度的确不高,主要是样品提取的RNA产量太低,样品是木本植物提取的RNA,不好提取,标曲采用混合cDNA为模板做的,
2 我也知道可以做克隆,用质粒来做标曲,但是有点麻烦,本实验室条件较不方便。。。
     ...

如果样本浓度不高,又不想做克隆,那就用PCR产物来做咯,PCR产物做个梯度稀释
但是一定要注意预防污染,最好把PCR产物拿到别的实验室(远点)开盖稀释
稀释后带回实验室做后面的
一步法逆转录RNA多重实时荧光定量PCR课题服务QQ461749807
16楼2013-12-05 11:36:55
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by real-time at 2013-12-05 11:36:55
如果样本浓度不高,又不想做克隆,那就用PCR产物来做咯,PCR产物做个梯度稀释
但是一定要注意预防污染,最好把PCR产物拿到别的实验室(远点)开盖稀释
稀释后带回实验室做后面的...

非常感谢
思路决定出路。。。
17楼2013-12-05 20:28:51
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