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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求教，荧光定量PCR标曲问题
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by real-time at 2013-11-27 08:37:46
你现在做标准曲线碰到的问题是你的样本浓度不够高
你的样品是什么，RAN DNA 或者 CDNA？
你的标准曲线是用什么做的？
如果后面要检测的样品是DNA，那可以做克隆，用线性化的质粒来做标准曲线和体系优化
如果后 ...

1 样本浓度的确不高，主要是样品提取的RNA产量太低，样品是木本植物提取的RNA，不好提取，标曲采用混合cDNA为模板做的，
2 我也知道可以做克隆，用质粒来做标曲，但是有点麻烦，本实验室条件较不方便。。。
    谢谢至尊木虫，问题都提在关键点上
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思路决定出路。。。
11楼2013-12-05 08:48:10
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yangjianchen at 2013-11-27 11:12:32
只要样品的Ct值落在标曲范围内都应该是可以接收到哦，但是梯度尽量多肯定是更好的。我们之前做都是设置7个梯度，最后去掉一两个差的。

这样严谨一些，确实比较好
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思路决定出路。。。
12楼2013-12-05 08:48:27
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love_st

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zzl2516 at 2013-11-26 08:37:57
你这扩增能曲线都没有到平台期肯定不行，建议提高模板和引物浓度，使扩增曲线打到平台期，让CT值提前一些，最好到10-20之间吧

兄弟，请教下，为什么没有平台期不行？提高模板和引物浓度他这个试验能达到你10-20么？
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13楼2013-12-05 09:32:24
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-11-26 19:21:46
好的。那你就用吧。如果投点分子生物学的国外期刊。那就难了...

出差去了好几天，现在才上线，请问是不是即使文章上不用放标曲，也要提供标曲原图给编辑看呢？因为我看一些外文其实并不需要放标曲上去。。。
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思路决定出路。。。
14楼2013-12-05 09:48:58
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沙门小rna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-12-05 09:48:58
出差去了好几天，现在才上线，请问是不是即使文章上不用放标曲，也要提供标曲原图给编辑看呢？因为我看一些外文其实并不需要放标曲上去。。。...

应该是的，不然可能得补

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应助之星就是我~没错。你没有看错~
15楼2013-12-05 10:46:49
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real-time

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-12-05 08:48:10
1 样本浓度的确不高，主要是样品提取的RNA产量太低，样品是木本植物提取的RNA，不好提取，标曲采用混合cDNA为模板做的，
2 我也知道可以做克隆，用质粒来做标曲，但是有点麻烦，本实验室条件较不方便。。。
     ...

如果样本浓度不高，又不想做克隆，那就用PCR产物来做咯，PCR产物做个梯度稀释
但是一定要注意预防污染，最好把PCR产物拿到别的实验室（远点）开盖稀释
稀释后带回实验室做后面的
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一步法逆转录RNA多重实时荧光定量PCR课题服务QQ461749807
16楼2013-12-05 11:36:55
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by real-time at 2013-12-05 11:36:55
如果样本浓度不高，又不想做克隆，那就用PCR产物来做咯，PCR产物做个梯度稀释
但是一定要注意预防污染，最好把PCR产物拿到别的实验室（远点）开盖稀释
稀释后带回实验室做后面的...

非常感谢
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思路决定出路。。。
17楼2013-12-05 20:28:51
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