| 查看: 4620 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
BamHI,SmaI平末端粘性末端连接问题
|
||
 最近一直在做工程菌构建问题，我的目的片段大约在1000bp左右，载体为7000左右，分别采用BamHI和SmaI对质粒和载体进行双酶切，片段是连到T载体上的，测序正确。PS:酶切位点不能更换了。分别双酶切后，割胶后胶回收。 连接体系如下： 片段：4uL 载体：1uL 连接酶：1uL（PS：TAKARA的solutionI连接酶） 在金属浴上16度连接过夜，转化JM109感受态。 感受态之前构建的连T载体转化效率都很高，目前还是在用同一批感受态。 已经做了近一个多月了，一直是平板上什么都没有，空空如也  。实验做得已不知所措，希望有这方面经验的可以耐心予以解答，感激不尽。 |
回复此楼» 猜你喜欢
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有156人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
hmily890404
新虫 (小有名气)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 1376.4
- 红花: 1
- 帖子: 145
- 在线: 20.7小时
- 虫号: 1441321
- 注册: 2011-10-13
- 性别: MM
- 专业: 农业昆虫学
12楼2015-04-13 15:11:50
2楼2013-11-22 16:00:41
3楼2013-11-22 16:06:56
zh10246
铁杆木虫 (文坛精英)
- 应助: 348 (大学生)
- 金币: 13591.3
- 散金: 115
- 红花: 47
- 帖子: 14597
- 在线: 888.3小时
- 虫号: 2786456
- 注册: 2013-11-08
- 专业: 细胞外基质
4楼2013-11-22 19:12:05