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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » ORF两翼区序列的获得方法
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Carnity

新虫 (正式写手)

[求助] ORF两翼区序列的获得方法

请教一下各位虫友，如果我知道某个基因的ORF序列，但是我想知道它的两翼区序列，我该怎么做？
最近使用了Genome Walking以及inverse PCR两种方法，但是获得的序列都不理想，不知道还有没有其他的什么好点的方法可以参考。
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1楼 2013-11-22 13:16:01
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回帖置顶 ( 共有1个 )

不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-25 13:18:46
gyesang: 回帖置顶 2013-11-25 13:18:47
Genome Walking以及inverse PCR 就能解决你的问题 但是挑单克隆比较麻烦 要挑个好的酶 看人品
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借你一生好不好
4楼2013-11-25 11:52:20
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普通回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是想知道这个ORF两侧的基因组序列还是cDNA5‘和3’UTR序列，如果是后者的话，可以做5‘和3’RACE
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-11-22 16:46:49
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Carnity

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-22 16:46:49
你是想知道这个ORF两侧的基因组序列还是cDNA5‘和3’UTR序列，如果是后者的话，可以做5‘和3’RACE

想获得基因组层次的数据，不是mRNA的
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3楼2013-11-25 11:21:52
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Carnity

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 不叶珏 at 2013-11-25 11:52:20
Genome Walking以及inverse PCR 就能解决你的问题 但是挑单克隆比较麻烦 要挑个好的酶 看人品

最近就在做着walking和iPCR，进展太慢，我又不能跟老板说这个得看人品……
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5楼2013-11-26 11:54:59
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Carnity at 2013-11-26 11:54:59
最近就在做着walking和iPCR，进展太慢，我又不能跟老板说这个得看人品……...

那你只能同时做很多了
用很多种限制酶 酶切
挑菌的时候尽量多挑一些菌
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借你一生好不好
6楼2013-11-26 13:44:54
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by Carnity at 2013-11-26 11:54:59
最近就在做着walking和iPCR，进展太慢，我又不能跟老板说这个得看人品……...

Genome walking,TAILPCR方法可以搞定的吧？
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jiayoubashaonian
7楼2013-11-26 16:18:19
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