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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RedE/T转染大肠菌
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daimingdao

新虫 (初入文坛)

[求助] RedE/T转染大肠菌 已有1人参与

看帖的客官好。
我在大肠菌中导入pRedE/T之后想重组BAC。hm之间的序列原来是330bp，重组后应该含有的外源序列（rpsl-neo）是1300左右。电转后用含有kanamycin的板子删选，挑取单菌落制作master plate并进行colony PCR。master plate也长得很好，可是P出来的结果却含有330和1300两条带。请问这是什么原因呢？不是应该重组之后就只有1300一条带么？
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1楼 2013-11-22 10:25:03
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huahu3600

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-22 16:50:20
这个需要多转化几次，330就没有了
或者，找个酶线性化一下，再连接，转化一下。挑取克隆鉴定一下，99%的情况下，330消除。

你得排除掉污染，菌液或菌落PCR最怕污染。
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2楼2013-11-22 16:34:22
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小尾巴亚杰

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你后面用不用把rpsl去掉呢？用不用再去掉neo这个抗性？
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3楼2014-04-21 13:07:41
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