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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] RT-qPCR

昨天做了一次荧光定量PCR，附件是扩增曲线以及溶解曲线。现在有几个问题想请教，内标的Ct值在8-9左右，可用吗？溶解曲线的高度代表什么？同时请结合附件图片对实验结果进行分析，谢谢！
RT-qPCR
Amplification Plot.jpg


RT-qPCR-1
Melt Curve.jpg
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1楼 2013-11-19 16:31:47
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-11-26 09:21:36
可以试试，两个ct相差不能太大，最好都落在18-28里，越相近越好，说明两个扩增产物效率一致。
...

14楼2013-11-26 14:48:31
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
joan198108: 金币+1 2013-11-20 08:27:35
myprayer: 金币+1, 鼓励发贴积极交流。 2013-11-20 12:26:37
内标太高了吧，稀释一下
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-11-19 18:37:41
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-19 18:37:41
内标太高了吧，稀释一下

内标Ct偏低，但是目的基因Ct值在合理范围之内，稀释后可能导致目的基因的Ct值太高
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-20 08:27:26
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yanfeier

金虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-21 01:30:13
溶解曲线代表是不是特异性扩增，溶解曲线正常了，才有判断的意义。个人认为。
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-20 21:19:58
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