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小葵Beryl

新虫 (小有名气)

[求助] 请大家帮忙看下银纳米簇在不同激发波长下的发射峰，请问是荧光峰吗？

请各位大虾帮忙，小女子万分感谢：

本人使用DNA分子作为配体合成的银纳米簇，用磷酸缓冲溶液作为介质，pH=6.6 ，并用荧光光谱做了表征，结果发现，随着激发光谱波长的红移，发射光谱峰位也跟着红移，且幅度不小，且最大值先增大后减小，550nm所对应的的峰值最大，如附件中的图形所示，上周开组会导师说有可能是散射峰，而不是荧光，请大家帮忙鉴定一下，是荧光还是散射？应该怎样确定呢？


请大家帮忙看下银纳米簇在不同激发波长下的发射峰，请问是荧光峰吗？
FL-EX(nm).jpg

[ Last edited by supernatural on 2013-11-19 at 22:16 ]
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做个向日葵样的女子，向着阳光生活
1楼 2013-11-18 17:24:02
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sally208

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小葵Beryl: 金币+4, ★★★★★最佳答案 2013-11-20 09:10:42
要想排除是不是散射峰，可以测一个相同仪器设置下，所用溶剂对应的谱图，对比一下就知道了。
同时，建议测一个激发谱。
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3楼2013-11-19 04:38:45
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yetaieva

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小葵Beryl at 2013-11-19 08:45:53
正常情况下，发射波长应该不随激发波长的移动而移动啊，只是强度有强有弱，是不是您曾合成过，也有类似的现象呢  谢谢...

Fluorescent Ag nanoclus-
ters stabilized by the chosen oligonucleotide present distinctive
emission peaks at 540 nm, 640 nm and 700 nm with the variation
of excitation wavelengths, as shown in fig2

上述文字参见文献J. Yuan, W. Guo and E. Wang, Anal Chim Acta, 2011, 706, 338-342. 讨论部分3.1处
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6楼2013-11-19 10:03:18
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SUN_Han_Jun

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 小葵Beryl at 2013-11-19 22:29:24
请问您看过类似的文献吗？怎么看出它是荧光呢？ 谢谢...

这个只能说是经验了，最简单的方法是把银簇溶液放在池子里，放到紫外平板上照射，如果荧光还可以的话，应该能看到荧光。
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14楼2013-11-19 23:02:50
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benpaopinle

金虫 (小有名气)
引用回帖:
29楼: Originally posted by 小葵Beryl at 2014-01-17 19:21:18
我觉得可能与碱基序列有关吧，你多查阅一下文献，看采用你所用的DNA作为配体实在什么条件下合成的。多试几次，就能合成出来了...

我也是查过好多篇文献综合了一下合成方法，至于DNA序列，不完全与文献相同，也是非常害怕DNA出问题啊！我把我的合成方法给你看看，还请前辈抽空指正啊！！！尝试了10多次没合成出来，也没人指导，因为就要放假了，所以心里也比较急！真心希望前辈指导！
下面是我综合多篇文献后的合成方法，反应体系是在1mL离心管中进行的：将DNA在90℃水浴中保持10min，慢慢冷却，取100ul 10uM DNA于PB（20mM，pH=7.4）中，然后加入10ul 600uM的AgNO3溶液，剧烈摇晃1min，孵育15min（室温避光和4℃避光都试了），之后向其中加入新配制的10ul 600uM的NaBH4溶液，剧烈摇晃1min，然后在4℃下避光反应4h（室温和反应过夜也试了）。反应体系的最终浓度：DNA-1uM，AgNO3-6uM，NaBH4-6uM；最终摩尔比为：DNA: Ag+：NaBH4=1:6:6；DNA序列 CCC CCC CCC CCC TTT TTC GTT TCC。
在上述合成方法上请允我附上几个问题：
1.DNA序列是否有问题；
2.Ag+与DNA的反应条件：时间长短如何影响，温度和光照如何控制；
3.NaBH4溶液的的配制（我是在冰水浴中），怎么样保证不会失效；
4.反应时间和温度以及光照条件如何设置；
5.反应的摩尔比对合成有什么影响。
如果可以的话，前辈能否将合适的DNA序列给我借鉴一下！我看文献好多荧光强度都不是很强，与DNA序列也有很大关系！因为时间关系，现在又要放假了，所以心里比较急！望前辈能悉心指导！不胜感激！！！！
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30楼2014-01-18 15:51:23
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sally208

专家顾问 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小葵Beryl at 2013-11-19 01:55:40
由于发射峰强度先增大后减小，故认为550nm处的激发波长为最佳激发波长，固定发射波长620nm,我反扫了激发谱，有两个峰，一个在280nm，一个在550nm，但是280nm激发峰的强度与620nm发射峰强差别很大，而550nm激发峰的 ...

很有可能得到的银簇是非单一原子组成的银簇的混合物，所以发射谱会随着激发谱的移动而移动。不同尺寸的银簇的发射谱不同，意味着如果你改变一个发射波长再扫激发谱的话，也许激发峰的位置也不一样。
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7楼2013-11-19 16:22:39
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SUN_Han_Jun

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小葵Beryl: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-11-20 09:11:14
是荧光峰，至于为什么发射随着激发变化而变化，我觉得可能是因为合成的银簇分子量和结构对称性不均一造成的。
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9楼2013-11-19 21:34:54
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yifanworld

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小葵Beryl: 金币+1, ★有帮助 2013-11-20 09:11:54
如果是拉曼散射的话，发射会随着激发变化而变化，但是拉曼散射是一定波数的。这个可以加以区别，你可以看看关于拉曼散射在荧光光谱中的一些书籍
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15楼2013-11-19 23:49:51
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stevenwu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小葵Beryl: 金币+1, ★有帮助 2013-11-20 09:12:05
应该是荧光峰，你可以测下荧光寿命确定一下啊。
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17楼2013-11-20 04:39:18
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SCU_magiclee

铁杆木虫 (正式写手)

硅材料研发人员
引用回帖:
22楼: Originally posted by dut_ameng at 2013-11-21 13:24:03
确定是荧光峰，但是银簇粒径不够均匀。

同意这个结论。
楼主，你看看这篇文献
Phys. Rev. Lett. 93, 077402 (2004)
Highly Fluorescent, Water-Soluble, Size-Tunable Gold Quantum Dots
金纳米团族就有这种可变荧光。。。。我估计银也有。。。
纳米团簇可以理解为数十个原子组合在一起，其能级结构应该接近于单粒子的，能级是离散的。。对应不同壳层的电子。。。不同的团簇，原子数目是不一样的，那么团簇中每个原子的电子的交叠程度就不一样（电子云重叠的多少），自然能级的分裂就不一样。。对应跃迁的能量就不一样。。。自然荧光就是可变的。
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是金子总会发光！！！
24楼2013-11-21 21:05:43
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小葵Beryl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
26楼: Originally posted by stevenwu at 2013-11-23 05:52:20
不是，如果是荧光的话，寿命应该就会在ns级，比如磷光的寿命就很长了。...

现在基本可以确定是荧光了，因为：

合成的银纳米簇是非单一数目原子组成团簇的混合物，由于不同团簇原子数目不一样，跃迁能量就不一样，不同原子数目的团簇分布呈泊松分布，所以不同激发对应不同发射，有好多文献报道

非常感谢
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做个向日葵样的女子，向着阳光生活
27楼2013-11-23 09:01:29
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小葵Beryl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
28楼: Originally posted by benpaopinle at 2014-01-17 15:14:04
楼主你好！我现在正以DNA为配体合成银纳米簇呢，看你发的荧光图效果挺不错的，我尝试了好多次，也没能合成出来，不知道哪里出了问题。恳请前辈指点合成方法！

我觉得可能与碱基序列有关吧，你多查阅一下文献，看采用你所用的DNA作为配体实在什么条件下合成的。多试几次，就能合成出来了
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做个向日葵样的女子，向着阳光生活
29楼2014-01-17 19:21:18
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普通回帖

yetaieva

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小葵Beryl: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-11-20 09:10:19
是荧光峰，银簇的发射峰不一定 有个最佳激发的
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2楼2013-11-18 21:01:25
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小葵Beryl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yetaieva at 2013-11-18 21:01:25
是荧光峰，银簇的发射峰不一定 有个最佳激发的

正常情况下，发射波长应该不随激发波长的移动而移动啊，只是强度有强有弱，是不是您曾合成过，也有类似的现象呢  谢谢
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做个向日葵样的女子，向着阳光生活
4楼2013-11-19 08:45:53
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小葵Beryl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sally208 at 2013-11-19 04:38:45
要想排除是不是散射峰，可以测一个相同仪器设置下，所用溶剂对应的谱图，对比一下就知道了。
同时，建议测一个激发谱。

由于发射峰强度先增大后减小，故认为550nm处的激发波长为最佳激发波长，固定发射波长620nm,我反扫了激发谱，有两个峰，一个在280nm，一个在550nm，但是280nm激发峰的强度与620nm发射峰强差别很大，而550nm激发峰的峰强与620nm处的发射峰强差不多，故认为550nm为最佳激发波长，这样的分析对吗？  谢谢

看了您发的好多帖子以及您对大家的应助，受益很多，希望以后有不懂的问题多向您请教，非常感谢您的应助

溶剂的谱图我还没测，接下来就测一下，看一下是否是溶剂散射的干扰，万分感谢
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做个向日葵样的女子，向着阳光生活
5楼2013-11-19 08:55:40
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光电池

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小葵Beryl at 2013-11-19 08:45:53
正常情况下，发射波长应该不随激发波长的移动而移动啊，只是强度有强有弱，是不是您曾合成过，也有类似的现象呢  谢谢...

我也觉的发射波长不会移动的。
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大家一起交流！加油！！！
8楼2013-11-19 17:04:41
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小葵Beryl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yetaieva at 2013-11-19 10:03:18
Fluorescent Ag nanoclus-
ters stabilized by the chosen oligonucleotide present distinctive
emission peaks at 540 nm, 640 nm and 700 nm with the variation
of excitation wavelengths, as shown in fi ...

已下载文献，等看后和您讨论，非常感谢
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做个向日葵样的女子，向着阳光生活
10楼2013-11-19 22:11:00
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