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肥猫p木虫 (正式写手)
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[交流]
我的实际使用情况谈各公司pcr mix的宿主基因组残留问题 已有3人参与
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一，天根的taq pcr mix，蓝色。正常价钱是150元每mL，做活动买5mL送5mL，就是相当于75元每mL。感觉还是略贵，但是做一般的pcr用着还不错。 二，TAKARA的绿色mix。这种mix我没买过，是从别的实验室要了一点来试用，感觉pcr的条带比较暗，后来我查了一下它的说明书，貌似里面酶量只是普通pcr的一半。大约是30多元每mL吧。个人感觉，虽然条带不太亮，用来做个菌p或是验证类的pcr还行，可以看到条带；至于其余的比较重要一点的pcr，慎用。 三，康为世纪的Taq MasterMix，蓝色。促销价是166元5mL。 四，康为世纪的Es Taq MasterMix，蓝色。促销价是187元5mL。我打电话问过技术支持，ES Taq与TAq的区别，答曰：ES Taq的保真行和延伸性更好。从延伸性来讲，我个人感觉差不多。我用康为世纪的Taq MasterMix 扩增3kb的条带，没什么问题；用Es Taq MasterMix扩增5kb的条带，目的条带不太明显，泳道有弥散的感觉。至于保真性，我没试过，感觉不太靠谱，只能呵呵。 前两天看见小木虫有人发帖子反映百泰克的2*PCR-MIX里面有宿主菌的基因组残留。于是今天我也试了一下，分别使用天根的taq pcr mix（一）、康为世纪的Taq MasterMix（三）、康为世纪的Es Taq MasterMix（四），不加模板，以16S 通用引物27f和1492r进行pcr扩增30循环，取5uL上样电泳。结果是：天根的taq pcr mix（一）有一条很暗淡的目的大小条带；康为世纪的Taq MasterMix（三）无可见条带；康为世纪的Es Taq MasterMix（四）有一条特别亮的目的大小条带，比marker还亮的那种！我是震惊了。我不确定这些结果是产品批次偶尔有质量问题，还是一直存在。 所以，还是请需要做环境样品文库的虫子们，在扩增16S片段的时候，谨慎使用酶吧。 |
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妙语1989
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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我用takara的就有问题。菌落pcr成功率为零。举报的是公司员工吧。使用者连这种都不能交流。还有更多人浪费时间金钱在这无谓之中。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-05-23 22:35:23
