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肥猫p

木虫 (正式写手)

[交流] 我的实际使用情况谈各公司pcr mix的宿主基因组残留问题 已有3人参与

一,天根的taq pcr mix,蓝色。正常价钱是150元每mL,做活动买5mL送5mL,就是相当于75元每mL。感觉还是略贵,但是做一般的pcr用着还不错。
二,TAKARA的绿色mix。这种mix我没买过,是从别的实验室要了一点来试用,感觉pcr的条带比较暗,后来我查了一下它的说明书,貌似里面酶量只是普通pcr的一半。大约是30多元每mL吧。个人感觉,虽然条带不太亮,用来做个菌p或是验证类的pcr还行,可以看到条带;至于其余的比较重要一点的pcr,慎用。
三,康为世纪的Taq MasterMix,蓝色。促销价是166元5mL。
四,康为世纪的Es Taq MasterMix,蓝色。促销价是187元5mL。我打电话问过技术支持,ES Taq与TAq的区别,答曰:ES Taq的保真行和延伸性更好。从延伸性来讲,我个人感觉差不多。我用康为世纪的Taq MasterMix 扩增3kb的条带,没什么问题;用Es Taq MasterMix扩增5kb的条带,目的条带不太明显,泳道有弥散的感觉。至于保真性,我没试过,感觉不太靠谱,只能呵呵。

前两天看见小木虫有人发帖子反映百泰克的2*PCR-MIX里面有宿主菌的基因组残留。于是今天我也试了一下,分别使用天根的taq pcr mix(一)、康为世纪的Taq MasterMix(三)、康为世纪的Es Taq MasterMix(四),不加模板,以16S 通用引物27f和1492r进行pcr扩增30循环,取5uL上样电泳。结果是:天根的taq pcr mix(一)有一条很暗淡的目的大小条带;康为世纪的Taq MasterMix(三)无可见条带;康为世纪的Es Taq MasterMix(四)有一条特别亮的目的大小条带,比marker还亮的那种!我是震惊了。我不确定这些结果是产品批次偶尔有质量问题,还是一直存在。

所以,还是请需要做环境样品文库的虫子们,在扩增16S片段的时候,谨慎使用酶吧。
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wangl2037

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
建议你别涉及公司,这个破论坛有一些虫友特别闲得蛋疼,我就被举报过,本来是为了赚金币转文章,妹的,给我一下扣完了。我要金币可是要发问题!~
2楼2013-11-18 12:16:49
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chenmx1257

新虫 (初入文坛)

3楼2017-05-23 22:33:28
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chenmx1257

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我用takara的就有问题。菌落pcr成功率为零。举报的是公司员工吧。使用者连这种都不能交流。还有更多人浪费时间金钱在这无谓之中。

发自小木虫Android客户端
4楼2017-05-23 22:35:23
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妙语1989

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
那想问一下楼主,16S PCR的时候用哪家的酶比较好呢?现在在做16S PCR,已经选了好多家的酶,但检测空白对照的时候还是有假阳性,搞不清楚是酶的问题还是其他的什么问题了
5楼2019-05-06 10:04:29
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